جداسازي و كلونينگ آنزيم آميلو پولولاناز از باكتري CohnellaA01

آنزيم هاي آميلولايتيك به منظور تجزيه ي سوبستراهاي پلي مورفيك طبيعي مثل نشاسته به كارمي روند. آميلوپولولاناز يكي از اعضاي خانواده 13 گليكوزيل هيدرولاز مي باشد. پولولاناز به دو نوع 1و2 تقسيم شده است. مطالعه ي بيوانفورماتيكي آنزيم آميلو پولولاناز، طراحي پرايمر و تكثير ژن آميلو پولولاناز از سويه ي بومي A01 Cohnella انجام خواهدگرفت. اين تحقيق از اين نظر كه سويه مورد مطالعه درآن به عنوان يك ذخيره ژنتيكي حاوي ژن هاي مفيد همچون ژن آميلوپولولاناز، بومي ايران مي باشد، بسيار حائز اهميت است. دراين تحقيق ابتدا DNA از باكتري كوهنلا استخراج شد، سپس با استفاده از پرايمرهاي ويژه ژن آنزيم آميلوپولولاناز با تكنيك PCR تكثير پيدا كردو پس از آن ژن آنزيم در پلاسميد PTZ57R كلون و درباكتري اشريشيا اكلي سوش DH5α ترانسفورم شد. پلاسميد نوتركيب پس از تكثير از باكتري ميزبان استخراج شد. صحت حضور ژن مربوطه در پلاسميد با روش PCR نشان مي دهد كه ژن آنزيم در پلاسميد كلون شده است و باند 2166 جفت بازي روي ژل آگاروز ايجاد شده كه هم اندازه ژن آميلو پولولاناز مي باشد.