بيان تخليص و تعيين مشخصات آنزيم نوتركيب لوسين دهيدروژناز از POS-91 Bacillus cereus

زمينه و هدف: لوسين دهيدروژناز (; EC 1.4.1.9 Leucine Dehydrogenase) عضوي از خانواده آنزيم هاي آمينو اسيد دهيدروژناز است كه بواسطه كاربردهايش درتوليد آمينو اسيدهاي واجد زنجيره شاخه دار، توليد تركيبات حدواسط دارويي و نيز سنجش لوسين در نمونه هاي خوني با هدف غربالگري بيماري بوي ادرار شربت افرا مورد توجه خاصي قرار گرفته است. دراين تحقيق، آنزيم لوسين دهيدروژناز شناسايي شده از سوش بومي Bacillus cereus مورد مطالعه قرار خواهد گرفت. روش ها: ابتدا ژن آنزيم مربوطه جداشده و سپس باكمك روش هاي مهندسي ژنتيك فرم نوتركيب آن توليد شد. بيان آنزيم نوتركيب توسط روش هاي سنجش فعاليت بيولوژيك و SDS- PAGE تاييد شده و با استفاده از روش كروماتوگرافي تمايلي تخليص گرديد. خصوصيات كينتيكي و فيزيك و شيميايي آنزيم توليد شده، نظير پارامترهاي كينتيكي ، دما و PH بهينه ي فعاليت و پايداري آنزيم،pH ايزوالكتريك ، تركيب آمينو اسيدي و جرم مولكولي نيز مطالعه شدند. نتايج: بهترين شرايط براي توليد لوسين دهيدروژناز نوتركيب باIPTG 0/5 ميلي مولار دردماي 23 درجه سانتي گراد و زمان القاء 5 ساعت به دست آمد و فعاليت آنزيم توليد شده، 2100U/ML محاسبه شد. ترادف نوكلئوتيدي آنزيم، پروتئيني به طول 398 آمينو اسيد را كد مي نمود و وزن مولكولي هر زير واحد توسط الكتروفورزSDS-PAGE، ا43 كيلو دالتون تخمين زده شد.در مجموع،ژن آنزيم لوسين دهيدروژناز از باكتري B. cereus POS-91 جداسازي و كلون شد و فرم نو تركيب آن در E. coli بيان گرديد. تحقيق انجام شده اولين گزارش از توليد آنزيم نوتركيب لوسين دهيدروژناز جداسازي شده از سوش مذكور مي باشد.