شماره ركورد كنفرانس :
4522
عنوان مقاله :
همسابه سازي پرئتويت P19 سركوبگر خاموشي RNA در ناقل بياني ويروسي گياهي
پديدآورندگان :
شرفي فاطمه دانشگاه شهيد چمران اهواز , حياتي جمشيد دانشگاه شهيد چمران اهواز , رجبي معماري حميد دانشگاه شهيد چمران اهواز
كليدواژه :
ژن P19 , ناقل ويروسي Ptrv2 , ويروس هاي گياهي
عنوان كنفرانس :
هشتمين همايش بيوتكنولوژي جمهوري اسلامي ايران و چهارمين همايش ملي امنيت زيستي
چكيده فارسي :
اغلب ويروس هاي گياهي پروتئين هاي سركوبگر خاموشي Viral Suppressors of RNA Silencing (VSR), RNA راكد مي كنند. اين سركوبگرها شامل تعدادي از پروتئين هاي ويروسي هستند كه با اجزاي مختلف مسير خاموشي RNA، در مراحل مختلف برهمكنش دارند. هدف از اين مطالعه بررسي امكان همسابه سازي ژن سركوبگر خموشي RNA ويروسهاي گياهي P19، در يك ناقل ويروسي گياهي جهت طراحي يك سازه ويروسي گياهي بود. اين ژن از توالي ويروس گياهي بوته انبوهي گوجه فرنگي Tomato bushy stunt virus جداسازي شده است. در فرآيند طراحي يك سازه ويروسي از ناقل ويروسي pTRV2 استفاده شده است. ناقل ويروسي به باكتري Escherishia coli سويه DH5a منتقل شده و جهت همسانه سازي ژن p19 در آن تخليص گرديد. آغازگرهاي اختصاصي جهت تكثير ژن P19 طراحي گرديد سپس، ناقل ويروسي pTRV2 و ژن p19 توسط آنزيم هاي برشي مشابه مورد هضم آنزيمي قرار گرفتند. ژن p19 در ناقل ويروسي تحت كنترل پيشبرنده CaMV35s و خاتمه دهنده NOS همسانه سازي شد. سازه بدست آمده pTRV2-P19 با روش شوك حرارتي به باكتري اشريشيا كلي سويه DH5s منتقل شده و باكتري هاي تراريخته بروي محيط كشت حاوي آنتي بيوتيك كانامايسين 50 ميلي گرم در ليتر انتخاب شدند. با استفاده از تكنيك Colony PCR ، استخراج ناقل ويروسي P19 pTRV2 و واكنش تكثير ژن P19، توالي يابي آن در بانك اطلاعاتي، حضور ژن p19 در ناقل ويروسي گياهي تائيد شد.
