بيان پروتئين پوششي ويروس PVX در باكتري به منظور توليد آنتي بادي اختصاصي ويروس

تشخيص ويروسها با استفاده از آنتيباديهاي اختصاصي اهميت ويژه اي براي كنترل بيماريهاي گياهي خصوصا در برنامه توليد بذر سيب زميني دارد. يكي از مهم ترين ويروسهاي سيب زميني (PVX) Potato X Potexvirus با گسترده جهاني ميباشد. در اين تحقيق به منظور توليد آنتيبادي اختصاصي PVX ژن (CP) Coat protein آن بصورت نوتركيب توليد گرديد. ابتدا، واكنش RT - PCRبا استفاده از آغازگرهاي اختصاصي حاوي سايت برشي براي تكثير CP انجام گرفت. الكتروفورز محصول PCR بر روي ژل آگارز، قطعه تكثير شده به طول 714BP را تاييد كرد. ژن CP و پلاسميد pGEX2TK توسط آنزيمهاي BamHI و ecoRI برش داده شدند و پس از خالص سازي ليگاسيون بين آنها صورت گرفت. پلاسميد نوتركيب pGEX2TK-CP به توان PVX با الكتروپوراسيون به باكتري E.coli منتقل و در آن تكثير گرديد. پس از گزينش باكتريهاي حاوي پلاسميد نوتركيب به كمك PCR و استخراج پلاسميد از آنها، توالييابي درست بودن كلون ايجاد شده را تاييد كرد. در ادامه پلاسميد نوتركيب به سويه RRosetta باكتري E.coli منتقل و كشت گرديد. با اضافه كردن IPTG در محيط كشت باكتري توليد پروتئين CP از روي پلاسميد انجام و پروتئين هاي باكتري استخراج شد. الكتروفورز پروتئين ، بيان شدن CP را نشان داد. اين پروتئين پس از خالص سازي جهت توليد آنتيبادي اختصاصي PVX مورد استفاده قرار ميگيرد.