جداسازي و تكثير فاژهاي پلي كلونال اختصاصي ويروس تريستزاي مركبات از كتابخانه فاژي

ويروس تريستزا يكي از مخرب ترين و از نظر اقتصادي مهم ترين عوامل بيماري زاي مركبات در دنيا به شمار مي رود.از آنجا كه اين ويروس در بيشتر مناطق مركبات خيز ايران گزارش شده است، لزوم مديريت اين بيماري براي حفظ محصول اجتناب ناپذير است. روش هاي جديد كنترل بيماري با استفاده ازمهندسي ژنتيك موفقيت هاي چشمگيري در اين زمينه داشته است، ازجمله اين روش ها ايجاد مقاومت با استفاده از آنتي بادي هاي نوتركيب مي باشد. يكي ازمهم ترين موانع در استفاده از اين راهكار، دسترسي به ژن هاي آنتي بادي اختصاصي مي باشد. در اين تحقيق با استفاده از بررسي كتابخانه فاژي، رسيدن به اين ژن ها ممكن گرديد. براي استخراج آنتي بادي هاي نوتركيب اختصاصي عليه ويروس تريستزادراين تحقيق ابتدا ژن كدكننده پروتئين ويروسي ازگياهان آلوده جداسازي و همسانه سازي شد و پروتئين مورد نظردر باكتري E.coli بيان شد و بعد از خالص سازي به روش كروماتوگرافي ميل تركيبي با استفاده از تكنولوژي نمايش فاژي، فاژهاي كتابخانه با استفاده از پروتئين نوتركيب به روش پنينگ(روشي جهت غربال كردن كتاب خانه فاژي موجود براي دستيابي به فاژهاي حامل قطعه ژن آنتي بادي مورد نظر) غربال شدند و در مراحل متوالي تكثير و غربالگري كتابخانه صورت گرفت. جهت تاييد اختصاصيت فاژهاي پلي كلونال از آزمون اليزا استفاده شد و نتايج نشان داد كه فاژهاي جداشده اختصاصيت بالايي در اتصال به پروتئين نوتركيب دارند و در دورهاي متوالي پنينگ كتابخانه اختصاصيت فاژها افزوده شد، از اين فاژها جهت توليد آنتي بادي منوكلونال مي توان استفاده نمود.