كلونينگ و بيان پروتئين ضد انعقادي هيدرودين با استفاده از وكتور pEZZ18

هيدرودين پلي پپتيدي با 66-65 اسيد آمينه است كه به عنوان مولكولي ضد انعقادي از غدد بزاقي زالو ترشح مي شوئ.هيدرودين نوتركيب عملكرد ضد انعقادي بسيار قدرتمندي در ترومبوز هاي شرياني و سياهرگي را داراست.هدف از اين مطالعه بيان پروتئين هيدرودين به صورت نوتركيب در E.coli مي باشد تا بمنظور مطالعات آتي مورد استفاده قرار گيرد.مواد و روش ها:با استفاده از پرايمر هاي طراحي شده ژن سنتتيك هيدرودين با روش PCR تكثير شد.ژن حاصل پس از تخليص ابتدا در pTG19-T PCR cloning vector و سپس با هضم آنزيمي توسط SacI/SalI در وكتور بياني pEZZ18 ساب كلون و به E.coli jm107 ترنسفرم شد.بيان پروتئين نوتركيب هيرودين بر روي SDS-PAGE آناليز و سپس وسترن بلاتينگ انجام شد.يافته ها: كلون و ساب كلون صورت گرفته با هضم آنزيمي و Colony PCR تاييد شد.همچنين بيان پروتئين نوتركيب هيرودين با SDS-PAGE و وسترن بلاتينگ به تاييد نهايي رسيد.نتيجه گيري: در اين مطالعه هيرودين در وكتور pEZZ18 كلون و به E.coli jm107 ترنسفرم شده و در نهايت پروتئين نوتركيب هيرودين تاييد مي شود.