تهيه كتابخانه فاژميدي VHH بز عليه فاكتور رشد اندوتليال رگي (VEGF ) و انتخاب VHH هاي اختصاصي عليه آن

فاكتور رشد اندوتليال رگي (VEGF) داراي نقشهاي پر اهميتي درآنژيوژنز (تشكيل رگهاي خوني جديد ) در تومور سرطاني بوده و بنابراين مولكول هدف مناسبي براي درمان متاستاز سرطان مي باشد . VHH (نانو بادي) ، داراي مزيتهاي فراواني براي درمان بيماريها مي باشد . در اين پروژه ابتدا يك كتابخانه فاژي بر عليه ناحيه اتصال به آنتي ژن VEGF-a ساخته شده و آنگاه نانو باديهاي داراي بيشترين تمايل اتصال به آنتي ژن از كتابخانه جدا شدند . روش: ناخيه اتصال به آنتي ژن VEGF-a به عنوان ايمنونوژن به شتر تزريق شد . پس از ايمن شدن شترها و تهيه لنفوسيت ،واكنش RT-PCR و nested PCR براي به دست آوردن VHH اجرا شد. قطعات VHH حاصل براي ساخت كتابخانه فاژي استفاده گرديدند . پس از رهاسازي فاژها و انجام مراحل غني سازي، بهترين مرحله غني سازي با استفاده از الايزا پلي كلونال فاژي انتخاب شده و تك كلونهاي مناسب با يك تست الايزاي مجدد جدا شدند . نتيجه تحقيق : پس از نهيه لنفوسيت و به دست آوردن RNA و cDNA، كتابخانه فاژي با موفقيت ساخته شده و چهار مرحله غني سازي انجام شد . در تست فاژ الايزا مرحله سوم غني سازي دااري بالاترين OD بوده و تك كلونها از اين مرحله انتخاب گرديند .