بررسي بيان پروتئين ESAT -6 مايكوباكترويوم بويس در سطح RNA و بررسي قابليت تحريك ايمني سلولي در موش با روش تكثير لنفوسيتي

بيماري سل گاوي كه توسط مايكوباكتريوم بويس ايجاد مي شود همچنان به عنوان يك معضل اقتصادي در كشورهاي مختلف و به منزله يك خطر جدي براي بهداشت عمومي در كشورهاي درحال توسعه مطرح مي باشد . يكي از راههاي كنترل بيماري سل گاوي واكسيناسيون مي باشد كه در اين راستا واكسن هاي نوتركيب به دليل مزاياي خاص بسيار مورد توجه مي باشند . ژن ESAT-6 كه كننده ي پروتئين ايمنيزاي 6 كيلو دالتوني ESAT مي باشد كه به عنوان يكي از آنتي ژن هاي مهم اين ميكروارگانيسم جهت توليد واكسن هاي نوتركيب مورد هدف مي باشد . در اين مطالعه ابتدا كل ژنوم باكتري مايكوباكتريوم بويس استخراج و ژن ESAT-6 با پرايمرهاي اختصاصي كلونينگ توسط PCR تكثير و خالص شد سپس با ايجاد سرهاي مكمل در ژن خالص شده ESAT با استفاده از آنزيمهاي برشي در وكتور pcDNA3.1 قرار گرفت . صحت پلاسميد نو تركيب با روش هاي هضم آنزيمي و تعيين توالي تاييد گرديد . سپس پلاسميد نوتركيب به صورت داخل ماهيچه اي به موش هاي BALB/c تزريق و پس از نمونه گيري از بافت ماهيچه كل RNA استخراج و كميت و كيفيت RNA تعين گرديد در موشهاي ايمن شده واكنش RT-PCR با پرايمرهاي اختصاصي مربوط به آنتي ژن مورد نظر جهت تاييد بيان زن در بافت ماهيچجه انجام شد . كه نتايج حاكي از بيان پلاسميد نوتركيب آنتيژنيك در سطح RNA بود. همچنين بر اساس تست MTT ، تحريك لنفوسيتي صورت پذيرفت و گروه هاي موش حساس شده با PPD شاخص تحريكي بالايي از خود نشان دادند .