Chromatographic Purification and Refolding of an Insoluble Histidine Tag Recombinant Human Interleukin-2 Expressed in E. coli

اينترلوكين - 2 انساني نوتركيب به صورت توده هاي پروتئيني در اشرشيا كولي بيان شده است. از اولتراسوند براي تخريب اين توده هاي پروتئيني استفاده شده است. اين توده هاي پروتئيني غيرفعال سپس در اوره 8 مولار / مركاپتواتانول 20 ميلي مولار حل شده است. خالص سازي و بازيابي شكل فضايي پروتئين در يك مرحله توسط روش كروماتوگرافي تمايلي يون فلزي تثبيت شده انجام شد. بازيابي شكل فضايي با گراديان خطي اوره از 8 مولار تا 0/5 مولار صورت پذيرفت. پروتئين هاي بازيابي شده در نهايت توسط ايميدازول 300 ميلي مولار از ستون شسته شد. سپس فعاليت پروتئين خالص شده ارزيابي شد كه نشان داد پروتئين بدست آمده مي تواند باعث تكثير سلول هاي T شود.

Recombinant human interleukin-2 was expressed as inclusion body in E.coli. An ultrasonic homogenization was done for cell disruption and then inclusion bodies isolated by centrifugation. The inactive inclusion bodies were solubilized in 8 M urea / 20 mM β-mercaptoethanol. Purification and refolding was done on immobilized metal-ion affinity chromatography (IMAC) in one step. A gradual refolding of the protein was performed on-column from 8 M to 0 M urea. The refolded protein was then eluted by refolding buffer containing 0.5 M urea and 300 mM imidazole. Then activity of the purified protein was investigated. It indicated that purified IL-2 can proliferate the T cells.