شماره ركورد كنفرانس :
5048
عنوان مقاله :
Optimization of cultural condition to improve recombinant bacteriorhodopsin mutant production in E.coli
Author/Authors :
Sirwan ،Khanchezar Chemical Engineering Department - Faculty of Engineering - Tarbiat Modares University, Tehran, Iran , Sameereh ،Hashemi-Najafabadi Chemical Engineering Department - Faculty of Engineering - Tarbiat Modares University, Tehran, Iran , Jaafar ،Mohammadian Moosa-Abadi Chemical Engineering Department - Faculty of Engineering - Tarbiat Modares University, Tehran, Iran , Rasoul ،Khalilzadeh Chemical Engineering Department - Faculty of Engineering - Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
كليدواژه :
Bacteriorhodopsin (BR) , Optimization , Fermentation , Expression
عنوان كنفرانس :
ششمين كنگره بين المللي مهندسي شيمي
چكيده فارسي :
در بررسي حاضر، بخش هاي C-D از باكتريورودوپسين (BR) در اشرشيا كلينوتركيب بيان شد. ژن موتان BR با در نظر گرفتن كدون مورد استفاده در اشرشيا كلي ساخته شد. ژن ساخته شده، در پلاسميد بياني pET31a+ در محل هاي برش Hind III و Nde I كلون شده و تحت كنترل پروموتور T7 با موفقيت بيان شد. پروتئين بيان شده، با SDS-PAGE آناليز شد. اثر دما ،(A) زمان القا (B) و زمان فرايند پس از القا (C) روي بازدهي بيان پروتئين (ميزان محصول بر واحد جرم سلول خشك)، با استفاده از آناليزهاي جدول Yates غربال گري شد. سه فاكتور B ،A و C و همچنين تداخل B*C مهم بوده و با روش تاگوچي بهينه شدند. شرايط بهينه عبارتند از: دما ºC 37 زمان القا در 0/7 OD600 و زمان فرايند پس از القا 4 ساعت. همچنين، بازدهي پيش بيني شده در شرايط بهينه 21/54% بود.
چكيده لاتين :
At present study, a C-D fragment of Bacterirhodopsin (BR) in recombinant E. coli was expressed. The BR mutant gene
was synthesized by consideration of E. coli codon usage. The synthesized gene was cloned in pET31a+ expression
plasmid at Nde I and Hind III restriction sites and expressed under T7 promoter successfully. The expressed protein was
analyzed by SDS-PAGE. The effect of temperature (A), induction time (B), and time of the process after induction (C),
on the protein expression yield (the amount of product per unit dry cell mass) were screened by Yates table analysis.
Three factors of A, B and C, and also the interaction of B*C were significant and optimized by Taguchi method. The
optimized condition was as: temperature 370C, induction time at OD600= 0.7 and time of the process after induction 4 h.
Also, the predicted yield at optimized condition was 21.54%.
