شناسايي و جداسازي سويه هاي مزرعه اي بروسلوز از سويه واكسنRev.1 با استفاده از روش PCR-RFLP

The Identification and isolation of field strains of brucellosis from vaccine strain Rev1 by using PCR RFLP method

بروسلوز از شايع ترين بيماري هاي مشترك بين انسان و دام است كه ضررهاي اقتصادي زيادي به صنعت دامپروري وارد مي-كند. با وجود اجراي فشرده برنامه هاي واكسيناسيون براي كنترل بروسلوز در صنعت دامپروري، شناسايي و تمايز بين سويه-هاي مزرعه اي و سويه واكسن بروسلا با محدوديت هايي روبه رو مي باشد. لذا توسعه ابزارهاي تشخيصي مولكولي براي تشخيص و تمايز بين سويه هاي مختلف بروسلوز ضروري است. هدف از انجام پژوهش كنوني استفاده از روش PCR-RFLP براي شناسايي و تمايز بين سويه هاي مزرعه اي و سويه واكسن Rev.1 مي باشد. براي تحقق اين هدف از ژن omp2 بروسلا به عنوان جايگاهي از دو نسخه تكراري تقريباً همولوگ استفاده شد. اين جايگاه در بين گونه‌ها و بيوتيپ‌هاي بروسلا از نظر حضور يا عدم حضور سايت PstI متفاوت مي باشد. تعداد 174 نمونه خون گوسفند با استفاده از روش تست رزبنگال مورد بررسي شدند كه از اين تعداد، 36 مورد با نتيجه مثبت همراه بودند. در ادامه نمونه هاي مثبت با استفاده از روش PCR-RFLP مورد بررسي تكميلي قرار گرفتند. نتايج پژوهش كنوني نشان داد كه روش PCR-RFLP، روشي سريع، دقيق و كاربردي جهت تمايز بين سويه هاي مزرعه اي و سويه واكسن Rev.1 مي باشد.

Brucellosis is one of the most common diseases between humans and animals, which causes high economic losses to the livestock industry. Despite the intensive implementation of vaccination programs to control brucellosis in the animal livestock industry, identification and differentiation between field strains and the Brucella vaccine strain is difficult. Therefore, it is necessary to develop molecular diagnostic tools to detect and distinguish between different strains of brucellosis. The purpose of this study is to use the PCR-RFLP method to identify and differentiate the field strains from the Rev.1 vaccine strain. To achieve this goal, the Brucella omp2 gene was used as a locus of two almost homologous duplicates. This position differs among Brucella species and biotypes in terms of the presence or absence of the PstI site. 174 blood samples of sheep were analysed using the Rose Bengal test method, of which 36 were positive. In the following, the positive samples were further investigated using the PCR-RFLP method. The results of the present study showed that the PCR-RFLP method is a fast, accurate, and practical method for distinguishing between the field strains and the Rev. 1 vaccine strain.