ساخت سازه نوتركيب گليكوپروتئين E2 ويروس HCV

Construction of the recombinant glycoprotein E2 structure of HCV virus

ويروس هپاتيت C شيوع و گسترش جهاني داشته و يكي از علل اصلي ابتلا به سيروز كبدي و از مهمترين دلايل مرگ و مير در سرتاسر جهان است. در حال حاضر واكسن مناسبي براي پيشگيري از ابتلا به اين ويروس وجود ندارد. گليگوپروتئين E2 يكي از اين پروتئين ها است كه عامل اصلي در اتصال و ورود به سلول ميزبان است. هدف اصلي اين مطالعه ساخت سازه بياني از ژن E2 ويروس هپاتيت C در ميزبان باكتريايي بود. به منظور انجام اين مطالعه ژن گليكوپروتئين E2 از سروتيپ a1 از بيماران جداسازي و شناسايي شد. با استفاده از RT-PCR ژن جداسازي شد و در ادامه با استفاده از Nested-PCR تكثير شد. سازه بياني ژن در وكتور pET21α ساخته شد و به درون باكتري هاي مستعدE.coli DH5-α انتقال داده و كلني هاي حاوي وكتور مدنظر را براساس مقاومت به آمپي سيلين و با استفاده از روش Colony PCR انتخاب شد. به منظور آناليز نهايي و تاييد كلونينگ ژن E2 قطعات كلون شده تعيين توالي شد و نتايج تعيين توالي، در پايگاه NCBI بلست شد. نتايج بدست آمده از اين مطالعه نشان دهنده صحت مراحل انجام آزمايش و كلون شدن دومين حفاظت شده ژن E2 در وكتور pET21α و بيان اين ژن در باكتري E.coli DH5αبود. با توجه به نقش گليكوپروتئين E2 در اتصال و ورود به سلول و همچنين توان تحريك سيستم ايمني همورال و سلولي توسط آن، E2 كانديد مناسبي براي مطالعه براي تهيه واكسن است. سازه نوتركيب اين مطالعه براي بررسي بيشتر و بررسي ساختار پروتئين و ايمني زايي بايد در مراحل بعدي مورد مطالعه قرار بگيرد.

Introduction: Hepatitis C virus has spread globally and is one of the main causes of liver cirrhosis and death worldwide. Currently, there is no suitable vaccine to prevent this virus. Glycoprotein E2 of this virus can stimulate the immune system. The main aim of this study was to construct an expression construct of the hepatitis C virus E2 gene in a bacterial host. In this study, glycoprotein E2 gene from serotype a1 was isolated and identified from patients, E2 gene was isolated by using RT-PCR and amplified Nested-PCR. The gene expression construct was made in pET21α vector and transferred into competent cells of E. coli DH5-α and Colonies containing the desired vector were selected based on ampicillin resistance and using the Colony PCR method. For final analysis of E2 gene cloning, the cloned fragments were sequenced and the sequencing results were blasted in the NCBI database. The results obtained from this study showed the correctness of the testing and cloning of the second protected E2 gene in pET21α vector and the expression of this gene in E. coli DH5α bacteria. Considering the role of glycoprotein E2 in binding and entering the cell, as well as its ability to stimulate the humoral and cellular immune system, E2 is a good candidate to study for the preparation of a vaccine. The recombinant structure of this study should be studied in the next steps for further investigation and investigation of protein structure and immunogenicity