جداسازي فاژها از ميكروبيوم Tenebrionidae عليه سالمونلا تيفي موريوم

Isolation of phages from Tenebrionidae microbiome against Salmonella typhimurium

سالمونلا از باكتريهاي بيماريزايي است كه افزايش مقاومت آنتي‌بيوتيك در اين باكتري سبب نگراني شده است؛ بنابراين توسعه‌ي راهكارهاي درماني جايگزين نظير فاژتراپي ضرورت دارد. هدف از اين مطالعه جداسازي فاژ ليتيك عليه سالمونلا تيفي‌موريوم از دستگاه گوارش حشره‌ي شبزي كويري (Tenebrionidae) است. پس از تخليص فاژها به روش آگار دو لايه، غني‌سازي و تغليظ انجام گرفت. در ادامه با شمارش تعداد پلاك‌ها، شمارگان فاژ و سرعت جذب آن‌ها محاسبه شد. در ارزيابي ضريب آلوده­سازي بهينه، فاژ و باكتري ميزبان در بازه زماني 12 ساعت گرماگذاري و در فواصل زماني معين، كدورت سوسپانسيون در طول موج 600 نانومتر خوانش انجام گرفت. سپس پايداري فاژها نسبت به طول موج UV، شرايط دمايي و pH متفاوت بررسي، همچنين اختصاصي­بودن و طيف ميزباني فاژها در برابر باكتري‌هاي ديگر سنجش شد. اين فاژ سرعت جذب بيش از 5 دقيقه دارد. سنجش پايداري‌ نسبت به گرما و pH نشان داد كه اين فاژ نسبت به طيف وسيعي از دما از°C 70- تا °C 55 و pH 5 تا 11 مقاوم است. فاژ مذكور قادر به تحمل طول موج UV نيست و در ضريب آلوده­سازي برابر يك، جمعيت باكتري بطور بهينه كنترل مي‌شود. اثركشندگي فاژ بر روي هفت باكتري شاخص نشان داد كه فقط در كشت كلبسيلا پنومونيه پلاك مشاهده ميشود. بنابراين فاژ مي‌تواند نامزد مناسبي براي كنترل سالمونلا تيفي‌موريوم باشد. پيش‌بيني مي‌شود كه فاژ جدا شده، يك جامبوفاژ باشد زيرا تنها در محيط كشت‌هاي حاوي آگار خيلي اندك (0.3 درصد) توانايي تشكيل پلاك را دارد.

Salmonella typhimurium is a pathogenic bacterium, with increasing antibiotic resistance. It is necessary to develop alternative treatments, such as phage therapy to overcome S. typhimurium antibiotic resistance. Here, lytic phages from the digestive tract of the desert weevil (Tenebrionidae) with impact on S. typhimurium were isolated. Phages were purified using the double-layer agar method, followed by their enrichment and concentration. Then, the titer of phages and their absorption rate were calculated by counting the plaques. For evaluation of the optimal Multiplicity of infection of phage, the turbidity of the suspension was measured at a wavelength of 600 nm for 12 hours. The stability of phages was investigated under UV wavelengths, a range of temperatures, and pH. The specificity and host range of phages were assessed. The phage showed an absorption rate of more than 5 minutes. The stability phage showed that it is resistant to a wide range of temperatures (-70°C to 55°C) and pH values (5 to 11), but it is not stable under UV wavelengths. The optimal control of the bacterial population was observed when the Multiplicity of infection was equal to one. The lytic effect of the phage was tested for seven indicator bacteria. Plaque formation was observed only for Klebsiella pneumoniae. Therefore, the phage can be a candidate for control of S. typhimurium infection. The isolated phage is predicted to be a jumbo phage because it can form plaques only in cultures containing a minimal amount of 0.3% agar.