توليد ميكروكپسول ها ي پروبيوتيكي باسيلوس مجاونسيس

Production of Bacillus mojavensis probiotic microcapsules

پروبيوتيك‌ها ميكروب‌هاي زنده‌اي هستند كه حضورشان در مواد غذايي، با بهبود فلورهاي ميكروبي دستگاه گوارشي اثارمفيدي براي ميزبان خود دارد. تحقيقات نشان داده كه باكتري‌هاي توليد كننده‌ي لاكتيك اسيد، به خصوص باسيلوس ها به دليل داشتن اندوسپور در دماهاي بالا پايدار باقيمانده و خواص پروبيوتيكي خود را در دماهاي بالا حفظ ميكنند. هدف اين پژوهش جداسازي باسيلوس مقاوم به عنوان پروبيوتيك از خاك و توليد ميكروكپسول از گونه‌ي برتر مي باشد. در اين پژهش ابتدا 5 نمونه‌ي از خاك پارك جمشيديه به صورت تصادفي برداشته شد. نمونه خاك طي روش تهيه رقت سريالي و تيمار حرارتي جهت جداسازي انحصاري جنس باسيلوس مورد آزمايش قرار گرفت. در ادامه خالص‌سازي كلني‌هاي رشد يافته و رنگ‌آميزي اسپور، آزمون كاتالاز، اكسيداز به منظور تاييد اوليه جنس باسيلوس انجام شد و سپس آزمايش‌هايي همچون مقاومت اسيد، نمك، تست نمك صفرا و مقاومت آنتي‌بيوتيكي به جهت تاييد پروبيوتيك بود باسيلوس‌هاي خالص شده انجام گرفت. به منظور مشخص شدن دقيق تر جنس و گونه‌ي برتر با ويژگي پروبيوتيكي شناسايي مولكولي (سكانسينگ 16srRNA) انجام گرفت. در مرحله بعد توليد ميكروكپسول سويه باسيلوس با ويژگي هاي پروبيوتيكي با استفاده از آلژينات‌سديم انجام گرديد. آناليزهاي تاييدي تشكيل ميكروكپسول جهت بررسي تاييد تشكيل ميكروكپسول و اندازه ذرات و شمارش ميكروكپسول‌ها و پايداري آن‌ها انجام گرديد. در اين پژوهش 32 سويه باسيلوس جداسازي شدند كه از اين 32 سويه 7 سويه ويژگي پروبيوتيكي از خود نشان داده و در نهايت سويه تحت عنوان ZK1 به عنوان سويه شاخص با نشان تمام ويژگي‌هاي پروبيوتيكي انتخاب گرديد. پس از سكانسينگ 16srRNA سويه مورد نظر با جنس و گونه‌ي باسيلوس موجاونسيس (Bacillus mojavensis) MK764986 با درصد تشابه 8/99 درصد تاييد هويت گرديد. نتايج ميكروكپسولاسيون با آلژينات‌سديم طي آناليزهاي ذكر شده با اندازه‌ي گويچه‌ها معادل12-5 ميكرومتر و پراكندگي يكنواخت را تاييد نمود. از دست آوردهاي اين مطالعه ميتوان اشاره نمود كه اكوسيستم خاك بومي كشور و سويه‌هاي باسيلوس جدا شده از آن، منبع مناسبي جهت توليد و معرفي باكتري بومي ارزشمند و غير بيماريزا به عنوان منبع جديد از باكتري‌هاي پروبيوتيكي ميتوان معرفي شوند. در اين پژوهش دريافتيم باسيلوس‌ها با دارا بودن اسپور پس از اثبات ويژگي‌هاي پروبيوتيكي‌شان به دليل مزايايي مانند ماندگاري بالا جهت بقا در فرآورده‌هاي غذايي و دارويي و ... ميتوانند مورد استفاده قرار گيرند.

probiotics are alive microbes that when added to food, improves the florid microbes in digestion system and it has positive effect for the host body. Study shows that the bacteria producing lactic acid specially bacillus in high temperature remain stable because of having endospore, and keep the probiotic features at cooking temperatures. The goal of this study is the separate resistant bacillus from the soil and to produce microcapsules of a strong species. In this research first, we took five sample from Jamshidieh park randomly, then by serial dilution and thermal agitation to separate exclusively bacillus in this research. Next purification of grown colonies and coloring the spore’s catalase test, oxidase test verifies the first material of bacillus was conducted. Next, some test such as acid resistance, salt test, bile salt test, and antibiotics resistance test were done to check the probiotics being of the bacillus which were purified, in order to clearly specify the material and species of the stronger one’s probiotic molecular sequencing (16srRNA) were conducted. Next stage, the production of microcapsules, the bacillus probiotic using sodium alginate were done. The analyses to verify production of microcapsules were done. in this study 32 strain of bacillus were separated in which 7 strain has probiotic features and finally (ZK1) was the specific strain with all the feature of probiotics was selected. After sequencing (16srRNA) the special strain had similar characteristic of Bacillus mojavensis up to 99.8% percent was identified. Microcapsuling result with sodium alginate in the mentioned process microcapsules with the size of 12-5 micrometer with uniform dispersion were verified. By the result of this study, we can say that the local soil in this country and the sample bacillus separated from it, is a good source to produce and identification of local valuable bacteria and non-pathogenic as new source of probiotic bacteria. In this study we found that bacillus whit spores which have probiotic feature for great maintenance can be use in food and pharmaceutical industries.