تثبيت آلل مقاومت ژن pfcrt مرتبط با مقاومت كلروكين در نمونه­هاي پلاسموديوم فالسيپاروم مناطق جنوب شرق ايران

Fixation of pfcrt resistance allele associated with Chloroquine resistance in Plasmodium falciparum isolates from Southeast of Iran

مالاريا يك چالش مهم بهداشت عمومي در جهان است كه گونه پلاسموديوم فالسيپاروم مرگبارترين گونه مالاريا است. مقاومت فالسيپاروم در برابر كلروكين يك چالش مهم براي كنترل مالاريا است. در ايران، از سال 2007 كلروكين به دليل ظهور آلل جهش يافته pfcrt در موقعيت K76T از خط اول درمان عليه پلاسموديوم فالسيپاروم حذف شد. در اين مطالعه، بررسي مولكولي حضور آلل مقاومت دارويي كلروكين (موقعيت K76T در ژن pfcrt ) در ايزوله هاي پلاسموديوم فالسيپاروم جمع آوري شده از جنوب شرقي ايران انجام شد. در مجموع 50 نمونه خون از بيماران مبتلا به پلاسموديوم فالسيپاروم جمع آوري شد. DNA ژنومي از هر نمونه استخراج شد و به عنوان الگو براي انجام واكنش Nested-PCR جهت تكثير ژن pfcrt استفاده شد. سپس محصولات PCR تحت تجزيه و تحليل براساس واكنش (RFLP ) با استفاده از آنزيم محدود كننده ApoI قرار گرفتند. نتيجه تجزيه و تحليل PCR-RFLP شيوع بالاي آلل جهش يافته در موقعيت 76 pfcrt (فراواني آلل موتانت 94٪) را نشان داد كه نشان دهنده تثبيت آلل جهش يافته pfcrt در ايزوله هاي پلاسموديوم فالسيپارو ايراني است. تثبيت آلل جهش يافته ژن pfcrt در موقعيت K76T با وجود عدم وجود فشار كلروكين ممكن است نشان دهد كه كلروكين نمي تواند در مناطق بومي ايران استفاده مجدد شود. توصيه مي شود كه نظارت بيشتر و مطالعات مولكولي جامع بر روي تعداد نمونه بيشتر انجام شود تا در مورد ماركرهاي مولكولي مرتبط با مقاومت به داروهاي ضد مالاريايي اطلاعات بيشتري جمع آوري شود.

Malaria is a significant public health challenge in the world, with Plasmodium falciparum being the deadliest species. P. falciparum resistance to Chloroquine is a significant challenge for malaria control. In Iran, since 2007 Chloroquine was removed from first-line treatment of P. falciparum because of the emergence of pfcrt mutant allele at position K76T. In this study, molecular surveillance of chloroquine drug resistance allele (K76T position in pfcrt gene) was carried out in P. falciparum isolates collected from southeast of Iran. A total of 50 blood samples were collected from patients diagnosed with P. falciparum. Genomic DNA was extracted from each sample and used as a template for Nested-PCR amplification of the pfcrt gene. The PCR products were then subjected to restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis using the restriction enzyme ApoI. The result of PCR-RFLP analysis showed high prevalence of mutant allele at position 76 of Pfcrt (94% frequency), which indicates the fixation of mutant allele of pfcrt in Iranian P. falciparum isolates. The fixation of mutant allele of pfcrt gene at position K76T despite the absence of Chloroquine pressure might indicate that Chlroquine cannot be reuse in endemic areas of Iran. Further surveillance and comprehensive molecular studies in larger population size are recommended to inform about the molecular markers associated with anti-malarial drug resistance.