ارزيابي كشت در دماي پايين به عنوان يك روش كارآمد در جداسازي سويه‌هاي مخمري از نمونه‌هاي محيطي كوه سري توچال

Evaluation of low temperature cultivation as an efficient method in isolation of yeast strains from environmental samples of Alpine region of Tochal

مخمرها زيستگاه هاي متنوعي از كره خاكي را در بر مي گيرند كه بسته به نوع سوبستري غذايي و پارامترهاي محيطي نوع سويه هاي مخمري استقرار يافته متفاوت بوده و آنها را بشكل بومي يا غير بومي و گاه جمعيت غالب مخمري به تصرف خود در مي آورند. روش هاي مختلفي جهت جداسازي مخمرها گزارش شده است كه مي توان از بگارگيري آنتي بيوتيك هاي ضد باكتريايي و ضد كپكي نام برد. علاوه بر جلوگيري و مهار رشد جمعيت باكتريايي و كپكي، كارآمد سازي روش در جداسازي اكثريت سويه هاي قابل كشت حائز اهميت است. در اين تحقيق اقدام به بكارگيري روش كشت در دماي پايين و مقايسه آن با روش معمول در دماي 20 درجه سلسيوس جهت بازيابي جدايه هاي مخمري گرديد. ابتدا نمونه هاي محيطي كوه سري توچال پس از نمونه برداري توسط استوانه هاي پلاستيكي استريل درون ميكروتيوب ها خرد و پس از تهيه سريال رقت در شرايط يكسان در چند تكرار با ميله شيشه اي سركج بر روي محيط آگاردار كشت مخمري پخش و در دماي 10 و 20 درجه سلسيوس كشت داده شدند. نتايج بيانگر تنوع قابل توجه و بالاتر گونه اي جدايه ها در دماي پايين تر بوده كه اين موضوع با استفاده از استخراج DNA ژنومي و تكثير ژن ريبوزومي و توالي يابي مورد تاييد قرار گرفت. اين افزايش بازيابي جدايه هاي مخمري عمدتا از رشد كنترل شده تر ريسه هاي كپكي در محيط كشت با كاهش اثر منفي پوششي و يا مهار كنندگي بر سويه هاي مخمري موجود در نمونه محيطي ناشي مي گردد.

Depending on the type of substrate and environmental parameters, yeasts occupy diverse habitats on the earth so the types of established yeast strains can be different as autochthonous or allochthonous form and sometimes dominant yeast population. Various methods have been reported for the isolation of yeasts, including the use of antibacterial and antifungal antibiotics. In addition to preventing and inhibiting the growth of bacterial and mold populations, it is important to make the method more efficient in isolating the majority of cultivable strains. In this research, low temperature cultivation method was used and compared with the usual method at 20 degrees Celsius to recover yeast isolates. First, the environmental samples of alpine Tochal were crushed by sterile plastic cylinders in microtubes, and after serial dilutions were prepared in the same conditions in several replicates spread with a glass rod on solid yeast culture at temperatures 10 and 20 degrees Celsius cultivation. The results showed significant and higher species diversity recovery of the isolates at lower temperature, which was confirmed by using genomic DNA extraction and ribosomal gene amplification and sequencing. This increase in the recovery of yeast isolates is mainly due to the more controlled growth of mold filaments in the culture medium with reducing negative covering or inhibitory effect on the yeast strains present in the environmental sample.