بررسي اثرهم افزايي نانوذرات كيتوزان وپلي ساكاريد گانودرما لوسيدم بر روي بيان ژن هاي 53Pو 3HER بر روي رده سلولي-7M

Investigating the synergistic effect of chitosan nanoparticles and Ganoderma lucidum polysaccharide on the expression of P53 and HER3 genes on MCF-7 cell line

يافتن مواد ضد سرطاني كه زيست سازگار باشندو عوارض جانبي نداشته باشند، بسيار اهميت دارد .قارچ خوراكي- دارويي lucidum Ganoderma تركيبات موثر ضد سرطاني دارد. كيتوزان عالوه بر خواص آنتي اكسيداني قابليت انكپسوله كردن وپايداري تركيبات پلي ساكاريدي را دارد. هدف مطالعه توليد نانوذره كيتوزان حامل پلي ساكاريد lucidum Ganoderma وتاثير آن بر بيان ژن هاي 53pو 3HER در رده سلولي -7MCF است. جداسازي پلي ساكاريد هايlucidum Ganoderma با روش استخراج با آب گرم 70 درجه سانتيگراد و ترسيب با اتانول 96% و پروتئين زدايي با روش (,1965sevage (صورت گرفت. سپس با روش كوپليمريزاسيون پيوند يوني . ماده موثره استخراج شده ازقارچ بر روي نانو ذره كيتوزان تثبيت شد. مورفولوژي و نوع پيوند نانو ذره ساخته شده با ميكروسكوپ الكترونيSEM اثبات و با روش FTIRتعيين شد.پس از تيمار سلول ها ي-7MCFبا غلظت هاي مختلف نانوذره سنتز شده و همچنين پلي ساكاريد استخراج شده از قارچ، ميزان بيان دو ژن53p , 3HERبا استفاده از روش PCR time Real سنجيده شد. تست فنول سولفوريك اسيد مقدارml/µg 23/77 پلي ساكاريد در Ganoderma lucidum را نشان داد. همچنين آناليز نتايجPCR time Real نشان داد كه نانوذره كيتوزان-پلي ساكاريد بيان ژن53p را به ميزان 7/3 افزايش وبيان ژن 3HER را به ميزان 0/36 كاهش داده است. همچنين عصاره پلي ساكاريد بيان ژن 53pرا به ميزان 5/2 افزايش و بيان ژن 3HERرا به ميزان 0/48كاهش داد مه در مقايسه با داروي شاهد تاموكسيفن كه بيان ژن53p را به ميزان 3/04 افزايش و بيان ژن 3HERرا به ميزان 0/22 كاهش داده است، نتايج بسيار مطلوبي مي باشد. نانوذره كيتوزان بستر مناسبي براي تثبيت پلي ساكاريدها مي باشد واين دو تركيب اثر همافزايي بر روي كاهش ميزان بيان ژن 53pو 3HER دارد كه منجر به مقاومت در برابر توموري شدن سلول ها مي شود و بعنوان يك مكمل دارويي ضد سرطان پيشنهاد مي شود

It is very important to find anti-cancer substances that are biocompatible and do not have side effects. The edible-medicinal mushroom Ganoderma lucidum has effective anti-cancer compounds. In addition to its antioxidant properties, chitosan has the ability to encapsulate and stabilize polysaccharide compounds. The purpose of the study is production of chitosan nanoparticle carrying Ganoderma lucidum polysaccharide and its effect on the expression of p53 and HER3 genes in MCF-7 cell line. Ganoderma lucidum polysaccharides were isolated by extraction with hot water at 70 degrees Celsius, precipitation with 96% ethanol, and deproteinization by the method (Sevage, 1965). Then, the effective substance extracted from the mushroom was fixed on the chitosan nanoparticle by ion bond copolymerization method. The morphology and type of nanoparticle grafting was confirmed by SEM electron microscope and determined by FTIR method. After treating MCF-7 cells with different concentrations of synthesized nanoparticle and polysaccharide extracted from mushroom, the expression level of two genes HER3 and p53 using the method Real time PCR was measured. Phenol sulfuric acid test showed 23.77 µg/ml of polysaccharide in Ganoderma lucidum. Also, the analysis of Real time PCR results showed that chitosan-polysaccharide nanoparticle increased p53 gene expression by 7.3 and decreased HER3 gene expression by 0.36. Also, polysaccharide extract increased p53 gene expression by 5.2. Meh reduced the HER3 gene by 0.48 compared to the control drug Tamoxifen which increased the expression of p53 gene by 3.04 and decreased the expression of HER3 gene by 0.22, these results are very favorable. Chitosan nanoparticle is a suitable platform for stabilization of polysaccharides and these two compounds have a synergistic effect on the reduction of p53 and HER3 gene expression, which leads to resistance against tumorigenesis of cells and it is recommended as an anti-cancer drug supplement.