بررسي اثر نانوذرات كيتوسان بارگذاري شده با پلي ساكاريدي گانودرما لوسيدوم بر بيان ژن هاي Bax و 2Bcl باروش PCR-Q

Investigating the effect of chitosan nanoparticles loaded with Ganoderma lucidum polysaccharide on the expression of Bax and Bcl2 genes Barosh Q-PCR

امروزه يافتن عوامل ضد سرطاني كه پايداري را در بدن انسان حفظ مي كنند بسيار مهم است. قارچ بومي Ganoderma lucidumداراي تركيبات ضد سرطاني موثر است. كيتوزان عالوه بر خواص آنتي اكسيداني ، قابليت كپسوله سازي و تثبيت تركيبات موثر گانودرما را دارد.هدف از انجام اين مطالعه توليد حامل هاي كيتوزان پلي ساكاريد lucidum Ganoderma و تأثير آن بر بيان ژن هاي bax و 2bcl در رده سلولي 3pc مي باشد. جداسازي پلي ساكاريدهاي Ganoderma lucidumبا استخراج آب گرم )70 درجه سانتيگراد( و تيمار با ٪96 اتانول و كمبود پروتئين انجام شد. سپس ، با استفاده از روش كوپليمريزاسيون تبادل يوني ، پلي ساكاريدها استخراج شده از مخاط بر روي نانوذره كيتوزان تثبيت شد. مورفولوژي و نوع انتقال نانو ذرات ساخته شده توسط ميكروسكوپ الكتروني SEM و با استفاده از روش FTIR تأييد شد. پس از تيمار سلولهاي 3pc با غلظت هاي مختلف نانوذرات و همچنين پلي ساكاريد استخراج شده از قارچ ، بيان دو ژن bax و 2bcl با استفاده از روش PCR Time Real اندازه گيري شد. نتايج آزمايش اسيد سولفوريك فنل وجود 23.77 ميكروگرم در ميلي ليتر پلي ساكاريد را در نمونه بومي lucidum Ganoderma نشان داد. همچنين ، تجزيه و تحليل نتايج PCR در زمان واقعي نشان داد كه نانوذره كيتوزان-پلي ساكاريد بيان بيان ژن bax را 4.6 افزايش داده و در حالي كه بيان ژن 2bcl 64/0كاهش يافته است. همچنين ، عصاره پلي ساكاريد بيان ژن 56/5 bax افزايش يافته و بيان ژن 81/0 2bcl كاهش يافته است استفاده از نانوذرات كيتوزان و پلي ساكاريدهاي قارچ هاي كالهدار بعنوان مكمل دارويي زيست سازگار با اثرات ضد سرطاني پيشنهاد مي شود

Nowadays, it is very important to find anticancer agents that maintain stability in the human body. The indigenous Ganoderma lucidum has effective anti-cancer compounds. In addition to its antioxidant properties, chitosan has the ability to encapsulate and stabilize the effective compounds of Ganoderma. The purpose of this study is the production of Ganoderma lucidum polysaccharide chitosan carriers and its effect on the expression of bax and bcl2 genes in pc3 cell line. Isolation of Ganoderma lucidum polysaccharides was done by hot water extraction (70°C) and treatment with 96% ethanol and protein deficiency. Then, using the ion exchange copolymerization method, polysaccharides extracted from mucus were stabilized on chitosan nanoparticles. The morphology and type of transport of nanoparticles were confirmed by SEM electron microscope and FTIR method. After treating pc3 cells with different concentrations of nanoparticles as well as polysaccharide extracted from mushrooms, the expression of bax and bcl2 genes was measured using Real Time PCR method. The results of the phenol sulfuric acid test showed the presence of 23.77 μg/ml of polysaccharide in the native sample of Ganoderma lucidum. Also, analysis of real-time PCR results showed that chitosan-polysaccharide nanoparticle increased bax gene expression by 4.6, while bcl2 gene expression decreased by 0.64. Also, polysaccharide extract increased bax gene expression by 5.56 and bcl2 gene expression decreased by 0.81. The use of chitosan nanoparticles and polysaccharides of mushrooms is suggested as a biocompatible medicinal supplement with anti-cancer effects.