بررسي خاصيت ضد سرطاني پلي ساكاريد لنتينان استخراج شده از قارچ شيتاكه برروي رده سلولي A

Investigating the anticancer properties of lentinan polysaccharide Extracted from shiitake mushroom on AGS cell line

پليساكاريدها فعالترين تركيبات قارچها هستند كه به دليل داشتن فعاليتهاي تعديلكننده ايمني ،خواص ضد سرطاني و ضد ويروسي مورد توجه قرار گرفته اند. پلي ساكاريد لنتينان موجود در قارچ edodes Lentinula، قارچ شيتاكه، يكي از محبوب ترين تركيبات دارويي مي باشد كه داراي خواص ضد توموري است همچنين در درمان التهاب روده از طريق مصرف خوراكي و بازيابي پاسخ هاي ايمني ضعيف شده با افزايش سن موثر است. هدف از اين مطالعه بررسي خواص ضد سرطاني لنتينان استخراج شده از قارچ شيتاكه بر روي سلول هاي سرطاني معده مي باشد. ابتدا ميسليوم هاي قارچ در محيط كشت جامد PDA كشت داده شدند، سپس كشت انبوه در محيط كشت مايع انجام شد. سپس با روش فنول سولفوريك اسيد مقدار پلي ساكاريد تعيين شد و با استفاده از دستگاه فريز دراير نمونه ها به صورت پودر درآمدند. استخراج پلي ساكاريد لنتينان از نمونه هاي پودر شده انجام شد . سپس از ستون كروماتوگرافي تعويض يوني دي اتيل آمينو سفادكس -25A استفاده شد. تست هاي FTIR و NMR جهت مشخصه يابي لنتينان انجام گرديد. رده سلول سرطاني معده AGS از مركز ذخاير ژنتيكي ايران تهيه و كشت داده شد، جهت سنجش خواص ضد سرطاني لنتينان بر روي سلول هاي سرطاني تست MTT در دو زمان24،48 ساعت در پنج غلظت 100،200،300،400 و 500انجام شد. طيف FTIR لنتينان، نوارهايي را نشان دادند كه معموالً در cm 3000-2800 ارتعاشات كششي H-C رانشان دادند،در تست NMR -1 منشا قارچ پليساكاريدي وجود دارند. نوارهاي جذبي در حدود پيك بزرگ مشاهده شده در حدود ppm 5/9 مربوط به پروتونهاي گروه 2CH عامل OH2CH ميباشد و براين اساس استخراج لنتينان تاييد شد. نتايج تست MTT نشان دهنده آن است كه با افزايش غلظت لنتينان درصد سلول هاي زنده كاهش مي يابد. در غلظت 500 بيش ترين كاهش سلول هاي زنده مشاهده شد. 50IC در اين مطالعه براي لنتينان 1.3محاسبه شد.

Polysaccharides are the most active compounds of mushrooms, which have been noted for their immunomodulatory, anticancer. The lentinan polysaccharide found in Lentinula edodes mushroom, Shiitake mushroom, is one of the most popular medicinal compounds that has anti-tumor properties and is also effective in treating intestinal inflammation through oral consumption and restoring weakened immune responses with aging. The purpose of this study is to investigate the anticancer properties of lentinan extracted from shiitake mushroom on gastric cancer cells. First, mushroom mycelium were cultured in PDA solid culture medium, then mass culture was done in liquid culture medium. Then, the amount of polysaccharide was determined by phenol-sulfuric acid method, and the samples were turned into powder using a freeze-dryer. Lentinan polysaccharide was extracted from powdered samples. Then diethylamino Sephadex A-25 ion exchange chromatography column was used. FTIR and NMR tests were performed to characterize lentinan. Gastric cancer cell line AGS was prepared and cultured from the center of genetic resources of Iran, in order to measure the anticancer properties of lentinan on cancer cells, MTT test was performed at tow times of 24, 48 hours in five concentrations of 100, 200, 300, 400 and 500. The FTIR spectrum of lentinan showed bands that are usually present in polysaccharide mushroom origin. The absorption bands at about 3000-2800 cm-1 showed C-H stretching vibrations, in the NMR test, the large peak observed at about 5.9 ppm is related to the protons of the CH2 group of the CH2OH agent, and therefore the extraction of lentinan was confirmed. The results of the MTT test show that the percentage of live cells decreases with the increase in the concentration of lentinan. In concentration of 500, the maximum decrease of living cells was observed. The IC50 in this study for lentinan was calculated to be 1.3.