تأثير عصاره متانولي گياه خرفه (L.oleracea Portulaca ) بر تكثير و تمايز سلولهاي بنيادي مزانشيمي انساني به سلولهاي استخواني

The effect of methanolic extract of Artemisia plant on the proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cells into bone cells

هدف از اين پژوهش بررسي اثر عصاره گياه خرفه بر تمايز استخواني سلولهاي بنيادي مزانشيمي است. نمونه خون مغز استخوان با رضايت افراد گرفته شد و پس از انتقال به آزمايشگاه سلولهاي آن استخراج و كشت داده شدند. سپس طي دوره كشت به منظور تاييد هويت سلولهاي بنيادي ماركرهاي سطحي با روش فلوسايتومتري بررسي شدند. بعد از ان زنده ماني سلولي پس از تيمار با عصاره گياه خرفه با assay MTT در دو بازه زماني 24 و 48 ساعت سنجش شد. پس از سه هفته كشت تمايزي سلول ها در كنار مقدار موثر عصاره تمايز سلولها با رنگ آميزي آليزارين رد براي تاييد تمايز استخواني سلولهاي بنيادي مزانشيمي بررسي شد.در نهايت بيان ژنهاي تيمار شده ي OCN و 1COL تحت عصاره با -Real PCR Time بررسي شد و نتايج مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج فلوسايتومتري نشان داد كه سلولهاي مورد بررسي داراي نشانگرهاي سطحي29CD ، 105CDو 90CD بوده و نشانگر سطحي45CD, 34CD,را نداشتند كه طبق پرتكل تاييدي بر مزانشيمال بودن سلولهاست. نتايج آزمون MTT نشان داد كه تا غلظت 300 ميكروگرم در ميليليتر، عصاره گياه خرفه به طور قابل توجهي زندهماني سلولي را كاهش نميدهد و نتايج رنگآميزي پس از كشت تمايزي نشان داد كه تشكيل كلسيم قابل مالحظهاي صورت گرفته است كه نشان دهنده تمايز موفقيتآميز به سمت سلولهاي استخواني است.. نتايج PCR-time Real ثابت كرد تيمار با عصاره گياه خرفه منجر به افزايش قابل توجهي در بيان ژن 1COL به ميزان حدود 2.58 برابر و بيان ژن OCN به ميزان حدود 2.37 برابر ميشود.به طور خالصه، تيمار سلولهاي بنيادي مزانشيمي با عصاره گياه خرفه تمايز سلولي را به سمت خطوط سلولي استخواني تشويق ميكند

The aim of this research was to investigate the effect of Portulaca oleracea osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Firstly, the extract of Portulaca oleracea was obtained, and then mesenchymal stem cells were extracted and cultured from bone marrow. Flow cytometry was performed to confirm the identity of these cells and examine the surface markers ,CD 90,CD29, CD105, CD90, CD34 and CD45. Alizarin Red staining was also performed to confirm the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Subsequently, cell viability after treatment with Portulaca oleracea extract was measured using the MTT assay at two time points: 24 and 72 hours. Finally, the expression of treated OCN and COL1 genes was examined using Real-Time PCR, and the results were evaluated using the Mann-Whitney test. Flow cytometry results showed that the examined cells expressed surface markers CD29, CD105, and CD90, while they did not express the CD45 and CD34 surface marker, indicating their mesenchymal stem cell nature. Alizarin Red staining results demonstrated significant calcium deposition, indicating successful differentiation toward osteoblasts. The cell viability assay showed that Portulaca oleracea extract significantly reduced cell viability only up to a concentration of 300 micrograms per milliliter, indicating its biocompatibility. The gene expression analysis revealed a significant increase in COL1 gene expression by approximately 2.58-fold and OCN gene expression by approximately 2.37-fold after treatment with Portulaca oleracea extract. Statistical analyses indicated that the p-values for both COL1 and OCN genes were greater than 0.05, indicating no significant difference in gene expression between the control and Portulaca oleracea -treated groups.In summary, treatment of mesenchymal stem cells with Portulaca oleracea extract promotes cellular differentiation toward osteoblastic lineages, indicating a positive effect of this extract on the process of cellular differentiation