تأثير عصاره متانولي گياه ارتميسيا (.L annua Artemisia (بر تكثير و تمايز سلولهاي بنيادي مزانشيمي انساني به سلولهاي استخواني

The effect of methanolic extract of Artemisia plant on the proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cells into bone cells

چندين مطالعه نشان داده تركيبات زيست فعال گياهان نقش خاصي در تنظيم سرعت تقسيم و تمايز سلولي دارند. اين مطالعه با هدف بررسي اثر عصاره متانولي ارتيميسيا در فرآيند تمايز استخواني در سلولهاي مزانشيمي مغز استخوان انجام شد. نمونه خون مغز استخوان گرفته شد و پس از انتقال به آزمايشگاه، سلولهاي بنيادي آن استخراج و كشت داده شدند. سپس طي دوره كشت به منظور تاييد هويت سلولهاي بنيادي ميزان بيان ماركرهاي سطحي 29CD، 105CD، 90CD و 45CD با روش فلوسايتومتري بررسي شدند. سپس آزمون MTT جهت بررسي سميت سلولي با عصاره گياه آرتيميسيادر دو بازه زماني 24 و 72 ساعت سنجش شد. همچنين سلول هاي بنيادي با غلظت 20 ميكروليتر در ميلي ليتر عصاره تيمار شدند. سپس رنگ آميزي آليزارين رد براي تاييد تمايز استخواني سلولهاي بنيادي مزانشيمي انجام گرديد.در نهايت بيان ژنهاي تيمار شده OCN و 1COL تحت عصاره با -Real PCR Time بررسي شد.نتايج فلوسايتومتري نشان داد كه سلولهاي مورد بررسي نشانگرهاي سطحي29CD ، 105CDو 90CD را بيان كرده و نشانگرهاي سطحي 45CD, 34CD بيان نداشتند. نتايج آزمون MTT در دو بازه زماني 24 و 72 ساعت نشان داد كه تا غلظت 20ميكروگرم در ميليليتر، عصاره گياه به طور قابل توجهي زندهماني سلولي را كاهش نميدهد و نتايج رنگآميزي پس از كشت تمايزي نشان داد كه تشكيل كلسيم قابل مالحظهاي صورت گرفته است و نتايج PCR-time Real اثبات كرد تيمار با عصاره گياه منجر به افزايش قابل توجهي در بيان ژن 1COLبه ميزان حدود 2.53 برابر و بيان ژن OCN به ميزان حدود 3.89 برابر ميشود. بطور خالصه تيمار سلولهاي بنيادي مزانشيمي با عصاره گياه آرتيميسيا تمايز سلولي را به سمت خطوط سلولي استخواني تشويق ميكند

The aim of this research was to investigate the effect of Artemisa Annua osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Firstly, the extract of Artemisia Annua was obtained, and then mesenchymal stem cells were extracted and cultured from bone marrow. Flow cytometry was performed to confirm the identity of these cells and examine the surface markers ,CD 90,CD29, CD105, CD90, CD34 and CD45. Alizarin Red staining was also performed to confirm the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Subsequently, cell viability after treatment with Artemisia Annua extract was measured using the MTT assay at two time points: 24 and 72 hours. Finally, the expression of treated OCN and COL1 genes was examined using Real-Time PCR, and the results were evaluated using the Mann-Whitney test. Flow cytometry results showed that the examined cells expressed surface markers CD29, CD105, and CD90, while they did not express the CD45 and CD34 surface marker, indicating their mesenchymal stem cell nature. Alizarin Red staining results demonstrated significant calcium deposition, indicating successful differentiation toward osteoblasts. The cell viability assay showed that Artemisia Annua extract significantly reduced cell viability only up to a concentration of 40 micrograms per milliliter, indicating its biocompatibility. The gene expression analysis revealed a significant increase in COL1 gene expression by approximately 2.53-fold and OCN gene expression by approximately 3.89 -fold after treatment with Artemisia Annua extract. Statistical analyses indicated that the p-values for both COL1 and OCN genes were greater than 0.05, indicating no significant difference in gene expression between the control and Artemisia Annua -treated groups. In summary, treatment of mesenchymal stem cells with Artemisia Annua extract promotes cellular differentiation toward osteoblastic lineages, indicating a positive effect of this extract on the process of cellular differentiation