كاربرد روش MTT و محيط كشت DMEM و FBS در مقايسه اثر عصاره گرده زنبورعسل بر سلول هاي سرطان پروستات و سلول هاي نرمال شبه فيبروبالستي

Application of MTT assay and media consisting of DMEM and FBS in comparing the effect of bee pollen extract on prostate cancer cells and normal fibroblastic cells

سرطان پروستات از شايع ترين سرطان هاست و مقابله با آن به روش پرتودرماني، اغلب سلول هاي سالم را متاثر كرده و خطر ابتال به سرطان هاي ثانويه مانند سرطان مثانه را افزايش مي دهد ولي مواد فيتوشيميايي چنين نيستند. به اين منظور از گرده هايي كه توسط زنبور هاي عسل منطقه زاگرس جمع آوري شده استفاده شد. گرده ها به كمك تله گرده گير كه بر كندوها نصب شدند به دست آمدند. عصاره متانلي از گرده ها تهيه شد. سلول هاي سرطان پروستات رده -3PC و همچنين سلولهاي نرمال شبه فيبروبالستي رده HFF از بانك سلولي ايران خريداري شدند. كشت در محيط آنتي بيوتيك دار DMEM و FBS انجام شد و پاساژ سلولي بعد از تراكم %90 سلول هاي محتوي فالسك صورت گرفت. غلظت هاي مختلف عصاره ،10 ،5 ،0/5 0/1 ميلي گرم بر ميلي ليتر تهيه شد. تست MTT در پليت 96 خانهاي استريل انجام شد. شدت رنگ توليد شده معرف تعداد سلول هاي زنده بود. محتواي هر چاهك در طول موج nm 570 در مقايسه با طول موج nm 630 با استفاده از دستگاه اليزا ريدر قرائت و درصد حيات سلول ها در مورد هر غلظت براي دو رده سلولي محاسبه شد. مقايسه اثر زمان تيمار ردههاي سلولي با عصاره گرده نشان داد مقدار 50IC( غلظتي كه در آن تنها %50 سلولها زنده مي مانند( در سلولهاي HFF در زمانهاي 48 و 72 ساعت تفاوت معناداري نداشت در حالي كه در سلولهاي -3PC اين تفاوت معنادار بود و با گذشت زمان، 50IC به شدت كاهش پيدا مي كرد (0.05 P(. به عبارتي اثر سيتوتوكسيك عصاره هم وابسته به دوز عصاره و هم وابسته به زمان بود. به اين ترتيب با به كارگيري عصاره گرده زنبورعسل مي توان ضمن حفظ سالمت بيشتر سلول هاي نرمال، به نابودي سلول هاي سرطاني پروستات اميدوار بود.

Prostate cancer is one of the most common cancers and dealing with it by radiation therapy often affects healthy cells and increases the risk of secondary cancers such as bladder cancer, but phytochemicals do not have such side effects. Bee pollen collected by honey bees in Zagros region was used for this purpose. Bee pollen was obtained with the help of pollination traps that were installed on the hives. Methanolic extract was prepared from pollens. prostate cancer cells (PC-3( and normal fibroblastic cells (HFF) were purchased from Iran Cell Bank. Cultivation was done in DMEM and FBS medium with antibiotics, and cell passage was done after 90% concentration of the cells in the flask. Different concentrations of extract were prepared as 10, 5, 0.5, 0.1 mg/ml. The MTT test was performed in a sterile 96-well plate. The intensity of the color produced was indicative of the number of viable cells. The content of each well was read at a wavelength of 570 nm compared to a wavelength of 630 nm using an ELISA reader, and the percentage of cell viability was calculated for each concentration for two cell lines. Comparison of the effect of treatment time of cell lines with pollen extract showed that the value of IC50 (concentration at which only 50% of cells survive) in HFF cells at 48 and 72 hours was not significantly different, while in PC-3 cells, this difference was significant IC50 decreased strongly through time (P