بررسي اثرات ژن كد كننده پپتيد Tachyplesin I خرچنگ نعل اسبي بر بيان ژن هاي Bcl-2 و Bax در سلول هاي ACHN

Effects of Tachyplesin I Peptide Coding Gene on Bcl-2 and Bax Gene Expression in ACHN Cells

زمينه و هدف : سرطان در نتيجه تقسيم غير قابل ‌كنترل سلول‌ها و در اثر عوامل محيطي و اختلال‌هاي ژنتيكي به وجود مي‌آيد. تومور مجموعه‌اي از سلول‌هاست كه به دليل رشد و تقسيم خارج از كنترل آن‌ها ايجاد مي‌شود . هدف از انجام اين پژوهش بررسي اثرات ژن كد كننده پپتيد Tachyplesin I بر بيان ژن هاي Bcl-2 و Bax در سلول هاي سرطان كليه رده ACHN مي باشد. مواد و روش ها: پلاسميد نوتركيب pcDNA3.1(+)حاوي ژن Tachyplesin I به روش شوك حرارتي وارد باكتري E.coli سويه TOP10 شد و سپس تخليص شد . سپس وكتور نوتركيب حاوي ژن Tachyplesin I به روش ليپوفكشن وارد سلول هاي ACHN شد و غربالگري توسط آنتي بيوتيك نئومايسين انجام گرفت. استخراج RNA و سنتز cDNA از سلول هاي ترانسفكت شده انجام شد. در نهايت واكنش real time RT-PCR به ‌منظور بررسي تغيير بيان ژن هاي Bcl-2 و Bax انجام شد. نتايج: پس از ليپوفكشن سلول ها در محيط كشت حاوي آنتي بيوتيك نئومايسين رشد كردند. سپس استخراج RNA و سنتز cDNA انجام شد. واكنش real time RT-PCR نشان داد كه بيان ژن Tachyplesin I در سلول‌هاي سرطان سينه رده ACHN سبب كاهش بيان ژن Bcl-2 (P= 0.0198) و افزايش بيان ژن Bax (P= 0.069) شد. نتيجه گيري : با توجه به اين كه حضور ژن Tachyplesin I باعث افزايش معني دار بيان در ژن Bax و كاهش معني دار بيان در ژن هاي Bcl-2 مي شود، احتمال مي رود كه بتواند سلول را به سمت آپوپتوز هدايت كند.

Background and Aim: Cancer occurs as a result of uncontrolled cell division and environmental factors and genetic disorders. A tumor is a collection of cells that develops due to their out-of-control growth and division. The aim of this study was to investigate the effects of the gene encoding bee venom melatonin on the expression of Bcl-2 and Bax genes in ACHN kidney cancer cells. Materials and Methods: Recombinant plasmid pcDNA3.1 (+) containing Tachyplesin I gene was entered into TOP10 strain E. coli by heat shock and then purified. The recombinant vector containing the Tachyplesin I gene was then inserted into ACHN cells by lipofection and screened with the antibiotic neomycin. RNA extraction and cDNA synthesis were performed from transfected cells. Finally, the real-time RT-PCR reaction was performed to investigate the altered expression of Bcl-2 and Bax genes. Results: After lipofection, the cells were grown in culture medium containing the antibiotic neomycin. Then RNA extraction and cDNA synthesis were performed. Real-time RT-PCR showed that the expression of Tachyplesin I gene in ACHN breast cancer cells decreased the expression of Bcl-2 gene (P = 0.0198) and increased the expression of Bax gene (P = 0.069). Conclusion: Considering that the presence of Tachyplesin I gene causes a significant increase in expression in Bax gene and a significant decrease in expression in Bcl-2 genes, it is likely that it can lead the cell to apoptosis.