بيان lncRNA هاي GHET1 و CCAT1 در سلول هاي AGS ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب حامل ژن كد كننده سم TSST-1 استافيلوكوكوس اورئوس تغيير مي كند

The expression of GHET1 and CCAT1 lncRNAs changes in AGS cells transfected with the recombinant vector carrying the Staphylococcus aureus TSST-1 gene

مقدمه و هدف : سرطان معده سومين عامل مرگ و مير به وسيله ي بيماري سرطان در سراسر جهان مي باشد. اكثر افرادي كه به سرطان معده مبتلا مي شوند تا مرحله ي پيچيده شدن بيماري پيش مي روند و در اين مرحله سرطان تشخيص داده مي شود. lncRNA ها جز RNA هاي تنظيمي سلول هستند. طيف وسيعي از شواهد نشان مي دهد كه نقش اصلي lncRNA، هدايت كمپلكس هاي اصلاح كننده كروماتين در برابر تغييرات اپي ژنتيكي مي باشد. هدف از اين تحقيق بررسي اثرات ژن سم TSST-1 باكتري استافيلوكوكوس اورئوس بر بيان lncRNAهاي GHET1 و CCAT1 در سلول هاي AGS ترانسفرم شده با وكتور نوتركيب pcDNA3.1(+)-TSST-1 به روش real time RT-PCR مي باشد. مواد و روش ها: پلاسميد نوتركيب حاوي ژن TSST-1 به روش شوك حرارتي وارد باكتري E.coli سويه TOP10 شد و سپس تخليص شد . وكتور نوتركيب به روش ليپوفكشن وارد سلول هاي AGS شد و غربالگري توسط آنتي بيوتيك نئومايسين انجام گرفت. استخراج RNA و سنتز cDNA از سلول هاي ترانسفكت شده انجام شد. در نهايت real time RT-PCR به‌منظور بررسي تغيير بيان lncRNA هاي نامبرده انجام شد. نتايج: نتايج حاصل از اين تست حاكي از آن مي باشد كه پس از واكنش ليپوفكشن، سلول هاي AGS در محيط حاوي آنتي-بيوتيك نئومايسين رشد كردند. پس از استخراج RNA و سنتز cDNA، واكنش real time RT-PCR انجام شد. نتايج گوياي اين مطلب بود كه پس از بيان سم TSST-1 درون سلول هاي سرطاني، بيان lncRNAهاي CCAT و GHET1 كاهش معني داري يافتند. نتيجه گيري : با توجه به كاهش بيان lncRNA هاي مورد مطالعه مي توان اينگونه نتيجه گرفت كه ژن سم TSST-1 موجب اثرات ضد سرطاني مي گردد و سلول را به سمت آپوپتوز هدايت مي كند.

Background: Gastric cancer is the third leading cause of death worldwide due to cancer. Most people who develop gastric cancer are progressing to the complex stage of the disease, and cancer is detected at this stage. The purpose of this study was to investigate the effects of TSST-1 gene expression on GHET1 and CCAT1 lncRNA expressions in AGS cells transfected with a new vector of pcDNA3.1 (+) - TSST-1 in real time RT-PCR. Materials and Methods: The recombinant plasmid containing TSST-1 gene was introduced into the E. coli strain of TOP10 by thermal shock method and then purified. The recombinant vector was introduced into the AGS cells by lipofection technique and screening was done by neomycin antibiotics. Extracting RNA and synthesizing cDNA from transfected cells. Finally, real time RT-PCR was performed to investigate the change of expression of these lncRNAs. Results: The results of this test indicate that after expression of TSST-1 toxin within cancer cells, the expression of CCAT1 and GHET1 lncRNA expression decreased significantly. Conclusion: The results indicate that the TSST-1 toxin gene leads to anticancer effects and directs the cell to apoptosis.