جداسازي استرپتومايسس هاي خاكزي توليد كننده مواد ضد ميكروبي به كنترل اشرشيا كلاي مقاوم به جنتامايسين از جنگل بناب و پارك ملي بختگان

Isolation of soil Streptomyces with antimicrobial effect on Gentamicin resistance Escherichia coli, from Bonab forest and Bakhtegan Nation Park

سابقه و هدف: عفونت‌هاي دستگاه ادراري يكي از شايع ترين عفونت‌هاي باكتريايي است. اشرشياكلي ارگانيسمي است كه در اكثر بيماران باعث عفونت ادراري مي‌شود. مقاومت دارويي زيادي گزارش شده است، متاسفانه مقاومت دارويي به جنتامايسين در حال افزايش است. محققان به دنبال جايگزيني براي داروهاي رايج هستند. يكي از جايگزين‌هاي مناسب متابوليت‌هاي توليد شده از استرپتومايسس هستند. استرپتومايسس‌ها باكتري‌هاي رشته اي هستند كه از خاك و آب جدا مي شوند. برخي از گونه‌هاي آن‌ها مي‌توانند آنتي‌بيوتيك‌ها يا متابوليت‌هاي ديگري ترشح كنند كه باعث از بين رفتن يا مهار رشد ساير عوامل بيماري‌زا مي‌شود. در اين مطالعه ما در حال غربالگري استرپتومايسس‌هايي بوديم كه داراي اثر ضد ميكروبي بر باكتري اشرشياكلي مقاوم به جنتامايسين از درياچه بختگان بودند. مواد و روش‌ها: براي جداسازي استرپتومايسس، نمونه‌ها به روش رقت‌سازي و كشت در نشاسته كازئين آگار مورد يررسي قرار گرفتند و در دماي 28 درجه سانتي‌گراد به مدت 7 روز انكوبه شدند. كلني‌هاي گچي و پودري شكل شناسايي شدند. براي جداسازي و خالص سازي باكتري و متابوليت توليد شده، باكتري‌هاي جدا شده در محيط ISP2 در دماي 28 درجه سانتي گراد و 150 دور در دقيقه به مدت 7 روز در انكوباتور شيكر دار كشت داده شدند. سپس سانتريفيوژ شده و به همان حجم، اتيل استات اضافه شد و در دماي 28 درجه سانتي گراد به مدت 5 ساعت انكوبه شد. سپس مايع به قيف جداكننده منتقل شد. فاز رويي به دستگاه تقطير منتقل شد. اين مايع براي آزمايشات ضد ميكروبي استفاده شد. مقاومت به جنتامايسين و ساير آنتي بيوتيك‌هاي رايج از 50 بيمار منتخب مورد بررسي قرار گرفت. سپس متابوليت‌هاي جدا شده از استرپتومايسس به روش ديسك ديفيوژن بر روي اين باكتري‌ها مورد بررسي قرار گرفت. در نهايت، استرپتومايسس‌ها توسط 16srRNA شناسايي شدند. يافته ها: 17 استرپتومايسس از درياچه بختگان جدا شد. يكي از آن‌ها اثر ضد ميكروبي نشان داده است. قطر هاله بدون رشد 1.24±19 بود، نتايج حاصل از 16srRNA نشان مي‌دهد كه اين باكتري 9/99٪ شبيه بهStreptomyces Streptomyces sp است. سويه 11K402. بحث و نتيجه گيري: استرپتومايسس‌ها توانايي بالايي در توليد متابوليت‌هاي ضد ميكروبي را دارند. با جداسازي و خالص سازي اين متابوليت‌ها مي‌توان از آن‌ها به عنوان جايگزيني براي آنتي‌بيوتيك‌ها و داروهاي عوامل رايج استفاده كرد.

Background: Urinary tract infections are one of the most clinical bacterial infections. Escherichia coli is the organism that causes UTIs in most patients. Many drugs resistance has been reported, unfortunately, drug gentamicin resistance increasing. Researchers are looking for alternative to replace common drug. One of alternatives are the metabolites produced from Streptomyces. Streptomyces are filamentous bacteria that isolation from soil and water. Some species of them can secretion antibiotics or other metabolites that kill or inhibit the growth of other microorganism. In this study we were screening for Streptomyces that had antimicrobial effect on Gentamycin resistance E. coli, from Bakhtegan Lake. Materials and Methods: For isolation of Streptomyces samples were tested by serial dilution method and culture in starch casein agar then incubated in 280c for 7 days. Gypsum and powder colonies were detected. For metabolite produced isolated bacteria were cultured in ISP2 broth in 28 0c and 150 rpm for 7 days. Then centrifuged and the same volume, ethyl acetate was added and incubated in 280c for 5h. Then liquid transferred to Separator funnel. The supernatant phase was transferred to distiller. This liquid used for antimicrobial tests. Resistance to Gentamicin and other common antibiotics was studied from 50 selected patients. Then, the isolated metabolites from Streptomyces were examined by disc diffusion method on these bacteria. Finally, streptomyces were identified by 16srRNA. Results: 17 Streptomyces were isolated from Bakhtegan Lake. One of them has shown antimicrobial effect. The diameter of the non-growth zone was 19±1.24, Results from 16srRNA indicate bacteria is 99.9% similar to Streptomyces Streptomyces sp. strain 11K402. Conclusion: Streptomyces have high ability to produce antimicrobial metabolites. By purification and formulation these metabolites, they can be used of them as an alternative to common antibiotics or antiagents.