بررسي إلقاي آپوپتوز توسط ژن كد كننده سم sehباكتري استافيلوكوكوس اورئوس در سلول هاي PC3

Investigation of induction of apoptosis by she venom coding gene of Staphylococcus aureus PC-3 cell

زمينه و هدف: در اين تحقيق، تاثير سم seh باكتري استافيلوكوكوس اورئوس بر ميزان آپاپتوز در رده سلولي PC-3 در سرطان پروستات انجام گرفت. seh يكي از اعضاي سموم مهم باكتريايي است. Bcl-2و Bax دو پروتئين مداخله كننده در مسير داخلي آپوپتوز و SURVIVIN به عنوان عملكرد دوگانه آن هم به عنوان مهار كننده آپوپتوز و هم تنظيم كننده ميتوز، شناخته شده است. مواد و روش ها: در اين تحقيق توالي ژن سم از طريق سايت NCBI به دست آمد و در وكتور pcDNA3.1(+) كلون شد. وكتور نوتركيب به درون باكتري E. coli سويه TOP10 به كمك شوك حرارتي منتقل شد. سلول هاي رده PC-3 تهيه شده از انستيتو پاستور با وكتور نوتركيب به روش ليپوفكشن ترانسفورم شد. پس از برداشت سلول ها، RNA استخراج و cDNA ساخته شد. real time PCR براي بررسي ميزان بيان برروي اين سلول ها و ژن هاي آپوپتوزي و يك گروه به عنوان شاهد صورت گرفت. از ژن رفرنس GAPDH استفاده شد. نتايج: نتايج حاصل نشان دهنده بيان افزايش ژن BAX و كاهش بيان BCL-2 و SURVIVIN بود. به صورتي كه با تزريق پلاسميد حاوي seh به رده سلولي PC-3 و پس از آن انجام real time PCR و بررسي نتايج آن نسبت به ژن رفرنس، مشخص شد كه seh بر روي بيان ژن هاي آپوپتوزي در رده سلولي PC-3 تأثير دارد. بحث و نتيجه گيري: سم انتروتوكسين H باكتري استافيلوكوكوس مي تواند اثرات مفيدي بر بيان ژن هاي آپوپتوزي در سرطان پروستات داشته باشد. به صورتي كه بيان ژن هاي آنتي آپوپتوتيك مثل BCL-2 و SURVIVIN راكاهش، و بيان ژن BAX را افزايش دهد.

Prostate cancer is one of the most common cancers among men to show certain symptoms prior to metastasis. Therefore, proper diagnosis and early detection in disease control and selection of therapeutic methods are important. In this study, the effect of Staphylococcus aureus was performed by Staphylococcus aureus on the PC – 3 cell level. Materials and methods:In this study, the sequence of the venom gene was obtained through the NCBI site and cloned into the vector pcDNA3.1 (+). The recombinant vector was transferred to E. coli strain TOP10 with thermal shock. PC-3 cells prepared from the Pasteur Institute with a recombinant vector transfected with lipofection. After removal of the cells, the RNA and cDNA RNA was constructed. Real-time RT-PCR for expression of these cells and apoptotic genes and one group as control. Reference GAPDH Gene was used. Result: The results showed that in seh-treated PC3 cell lines, the expression of BAX gene was increased statistically significant (P 0.05) in compared to control PC3 cell lines (transfected by empty pcDNA3.1(+)). As well, the reduces of BCL-2 expression was observed in pcDNA3.1(+)-seh transfected cells in compare with control group. So, these finding showed that changing in mRNA expression of BCL-2 and BAX genes support cell apoptosis. Conclusion: SEH toxin of S. aureus has useful effects on the expression of BAX gene as a pro-apoptotic factor. On the other hand, anti-apoptotic BCL-2 gene was down-regulated after SEH toxin treatment of PC3 cancer cell lines. So, it seems that the SEH toxin of S. aureus has a high potential for cancer treatment.