ميزان بيان lncRNAهاي GAS5، NEAT1 و SRA در سلول‌هاي MCF-7 ترانسفورم شده با وكتور نوتركيب حامل ژن انتروتوكسين B استافيلوكوكوس اورئوس تغيير مي يابد

The expression levels of lncRNAs GAS5, NEAT1 and SRA are changed in MCF-7 cells transfected with Staphylococcus aureus SEB Gene were changed

زمينه و هدف : سرطان سينه يك بيماري ژنتيكي است كه حدود 5 تا 10 درصد احتمال دارد به ارث برسد. اين بيماري به عنوان رايج ترين نوع سرطان بعد از سرطان پوست در زنان مي باشد. مطالعات اخير نشان داده است كه در افراد مبتلا به بيماري سرطان، بيان lncRNA ها كاهش و يا افزايش بيان دارا هستند. هدف از اين تحقيق بررسي اثرات ژن SEB باكتري استافيلوكوكوس اورئوس بيان lncRNAهاي GAS5، NEAT1 و SRA در سلول هاي MCF-7 ترانسفورم شده با وكتور نوتركيب pcDNA3.1(+)-SEB به روش Real time RT-PCR مي باشد. مواد و روش ها: پلاسميد نوتركيب حاوي ژن SEB به روش شوك حرارتي وارد باكتري E.coli سويه TOP10 شد و سپس تخليص شد . وكتور نوتركيب به روش ليپوفكشن وارد سلول هاي MCF-7 شد و غربالگري توسط آنتي بيوتيك نئومايسين (600 ميكروگرم در ميلي ليتر) انجام گرفت. استخراج RNA و سنتز cDNA از سلول هاي ترانسفكت شده انجام شد. در نهايتreal time RT-PCR به ‌منظور بررسي تغيير بيان lncRNA هاي نامبرده انجام شد. نتايج: پس از انجام واكنش ليپوفكشن، سلول هايي كه پلاسميد نوتركيب را دريافت كرده بودند در محيط كشت حلوي نئومايسين رشد كردند. پس از استخراج RNA و سنتز cDNA، واكنش real time RT-PCR انجام گرفت و تغيير بيان lncRNA هاي مربوطه تاييد شد. بيان lncRNA هاي SRA و NEAT1 به طور معني داري نسبت به گروه شاهد كاهش و GAS5 افزايش داشته اند. نتيجه گيري: ژن سم SEB موجب اثرات ضد سرطاني مي گردد و با توجه به تغيير بيان lncRNAهاي ذكر شده به نظر مي-رسد سلول را به سمت آپوپتوز هدايت مي كند.

Background: Breast cancer is a genetic disorder that can be inherited from about 5 to 10 percent. This disease is the most common type of cancer after skin cancer in women. The purpose of this study was to investigate the effects of SEB gene expression on the expression of GAS5, NEAT1 and SRA lncRNAs in MCF-7 cells transfected with the new vector pcDNA3.1(+)-SEB via Real Time RT-PCR method. Materials and Methods: The recombinant plasmid containing SEB gene was introduced into the E. coli strain of TOP10 by thermal shock method and then purified. The recombinant vector was introduced into the MCF-7 cells by lipofection method and screening was done by neomycin antibiotic. Extracting RNA and synthesizing cDNA from transfected cells was performed. Finally, real time RT-PCR was performed to investigate the change of expression of these lncRNAs. Results: The change of expression of relevant lncRNAs was confirmed. The expression of SRA and NEAT1 significantly decreased in comparison with the control group and GAS5 increased. Conclusion: The results indicate that the SEB enterotoxin gene causes anticancer effects and leads the cell to apoptosis.