بررسي ميزان بيان lncRNAهاي GAS5، NEAT1 و SRA در سلول‌هاي MCF-7 ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب pcDNA3.1(+)-Alpha toxin

Study of the expression of GAS5, NEAT1 and SRA lncRNAs in MCF-7 cells transfected with pcDNA3.1(+)-Alpha toxin recombinant vector

مقدمه و هدف: سرطان در نتيجه تقسيم غيرقابل كنترل سلول‌ها و در اثر عوامل محيطي و اختلال‌هاي ژنتيكي به وجود مي‌آيد. تومور مجموعه‌اي از سلول‌هاست كه به دليل رشد و تقسيم خارج از كنترل آن‌ها ايجاد مي‌شود. مطالعات اخير نشان مي‌دهد كه چندين جايگاه خطر موثر در ايجاد سرطان، به lncRNAها رونويسي مي‌شوند و رونوشت‌هاي حاصل، نقش‌هاي كليدي در فرايند تومورزايي ايفا مي‌كنند. هدف از انجام اين پژوهش بررسي تغيير بيان lncRNAهاي SRA، NEAT1 و GAS5 بعد از تيمار سلول سرطان سينه با سم آلفاتوكسين باكتري استافيلوكوكوس اورئوس مي‌باشد. مواد و روش‌ها: پلاسميد نوتركيب pcDNA.3(+) حاوي ژن آلفاتوكسين به روش شوك حرارتي وارد باكتري E.coli سويه TOP10 شد و سپس تخليص شد. وكتور نوتركيب حاوي ژن آلفاتوسين به روش ليپوفكشن وارد سلولهاي MCF-7 شد و غربالگري توسط آنتي بيوتيك نئومايسين انجام گرفت. استخراج RNA و سنتز cDNA از سلول هاي ترانسفكت شده انجام شد. در نهايت real time RT-PCR به منظور بررسي تغيير بيان lncRNAهايSRA, NEAT1 وGAS5 انجام شد. نتايج: پس از ليپوفكشن سلول‌ها در محيط كشت حاوي آنتي بيوتيك نئومايسين رشد كردند. سپس استخراج RNA و سنتز cDNA انجام شد. واكنش real time RT-PCR نشان داد كه بيان ژن آلفاتوكسين در سلول‌هاي سرطان سينه رده MCF-7 سبب كاهش بيان IncRNAهاي NEAT1 و SRA نسبت به گروه شاهد و همچنين افزايش بيان GAS5 شد. نتيجه‌گيري: با توجه به اين كه IncRNA GAS5 باعث افزايش معني‌دار بيان و IncRNAهاي NEAT1 و SRA كاهش بيان را نشان داده‌اند در نتيجه موجب اثرات ضد سرطاني مي‌گردند و سلول را مي‌توانند به سمت آپوپتوز هدايت كنند.

Background: Cancer is the result of uncontrolled cell division and is caused by environmental factors and genetic disorders. A tumor is a collection of cells that are caused by their growth and division beyond their control. Cell death is a mechanism or set of genetically engineered events in which the cell is forced into suicide. The aim of this study was to investigate the change of expression of SRA, NEAT1 and GAS5 lncRNAs after treatment of breast cancer cells with alpha toxin. Materials and Methods: The recombinant plasmid containing alpha toxin gene was introduced into the E. coli strain of TOP10 by thermal shock method and then purified. The recombinant vector was introduced into the MCF-7 cells by lipofection method and screening was done by neomycin antibiotic. Extracting RNA and synthesizing cDNA from transfected cells. Finally, real time RT-PCR was performed to investigate the change of expression of SRA, NEAT1 and GAS5 lncRNA expressions. Results: The expression of alpha toxin gene in MCF-7 breast cancer cells reduced the expression of SRA, NEAT1 and GAS5 lncRNA expressions compared to the control group. Conclusion: The results indicate that the alpha toxin toxin gene causes anticancer effects and leads the cell to apoptosis.