بررسي اثرات ژن Alpha toxin باكتري استافيلوكوكوس اورئوس بر بيان ژن هاي BCL-2،BAX و Survivin در سلول هاي MCF-7

Investigating the effects of Staphylococcus aureus Alpha toxin gene on the expression of BCL-2, BAX and Survivin genes in MCF-7 cells

زمينه و هدف : سرطان در نتيجه تقسيم غيرقابل‌كنترل سلول‌ها، و در اثر عوامل محيطي و اختلال‌هاي ژنتيكي به وجود مي‌آيد. تومور مجموعه‌اي از سلول‌هاست كه به دليل رشد و تقسيم خارج از كنترل آن‌ها ايجاد مي‌شود . مرگ سلولي يك مكانيسم يا مجموعه‌اي از وقايع برنامه‌ريزي‌شده‌ي ژنتيكي مي‌باشد كه طي آن سلول به خودكشي واداشته مي‌شود. هدف از انجام اين پژوهش بررسي تغيير بيان ژن هاي آپوپتوزي بعد از تيمار سلول سرطان سينه باسم آلفا توكسين مي باشد. مواد و روش ها: پلاسميد نوتركيب حاوي ژن Alpha toxin به روش شوك حرارتي وارد باكتري E.coli سويه TOP10 شد و پس از تكثير ، پلاسميد نوتركيب استخراج شد . سلول‌هاي MCF-7 مراحل كشت آن‌ها انجام شد و آماده‌سازي آن‌ها صورت گرفت. سپس مراحل ليپوفكشن به‌منظور واردكردن پلاسميد به اين سلول‌ها انجام شد و پس از غربال‌گري توسط آنتي‌بيوتيك نئومايسين آماده استخراج RNA شدند. سپس استخراج RNA انجام شد و cDNA توسط كيت يكتا تجهيز آزما سنتز شد و درنهايت Real time RT-PCR به‌منظور بررسي تغيير بيان ژن هاي Bcl-2، Bax و Survivin انجام شد. نتيجه گيري : بيان ژن Alpha toxin در سلول‌هاي سرطان سينه در رده MCF-7 سبب كاهش بيان ژن آنتي آپوپتوزي Bcl-2 همچنين افزايش بيان ژن پروآپوپتوزي Bax و كاهش بيان ژن آنتي آپوپتوزي Survivin مي‌شود كه درنهايت منجر به القاي آپوپتوز و حذف توده توموري مي‌شود.

Background and objective: Uncontrolled cell division, in addition to genetic disorders and environmental factors, can lead to cancer. A tumor is a group of cells that result from uncontrolled cell growth and division. Cell death is a process or sequence of genetically predetermined events that force a cell to die. This study aims to look into the changes in apoptotic gene expression following alpha-toxin treatment of breast cancer cells. Materials and methods: E. coli strain TOP10 was inoculated with a recombinant plasmid carrying the Alpha toxin gene using the heat shock method. Following multiplication, the recombinant plasmid was removed. The MCF-7 cells were produced and cultivated. Following the insertion of the plasmid into these cells via lipofection, they were screened with the antibiotic neomycin and prepared for RNA extraction. After RNA extraction and cDNA synthesis using the Yekta Tehiz Azma kit, real-time RT-PCR was carried out to look at changes in the expression of the Bcl-2, Bax, and Survivin genes. Conclusion: The expression of the alpha toxin gene in MCF-7 breast cancer cells results in the induction of apoptosis and the removal of the tumor mass by decreasing the expression of the anti-apoptotic gene Bcl-2, increasing the expression of the pro-apoptotic gene Bax, and decreasing the expression of the anti-apoptotic gene Survivin.