بررسي ميزان بيان lncRNAهاي GHET1 و CCAT1 در سلول هاي AGS ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب حامل ژن انتروتوكسين B استافيلوكوكوس اورئوس

Evaluation of the expression of GHET1 and CCAT1 lncRNAs in the AGS cells that transfected with recombinant vector contain enterotoxin B gene of Staphylococcus aureus

مقدمه و هدف: از نظر تاريخي آدنوكاسينوم معده يكي از علل عمده مرگ و مير ناشي از سرطان در جهان بوده است. انتروتوكسين B يكي از بزرگ ترين سوپرآنتي ژن ها مي باشد و جزء مولكول هاي تهاجمي به حساب مي آيد و همچنين در سرطان‌هاي مختلف نقش مهمي در القاي آپوپتوز داشته است. شواهد نشان داده‌اند كه بخش چشم‌گيري از عامل‌هاي مستعدكننده به سرطان را نمي‌توان به تغيير در توالي‌هاي كدكننده پروتئين نسبت داد. شناسايي شمار زيادي از RNAهاي غير كدكننده‌ي بلند (lncRNAs) با طول بيشتر از 200 جفت باز در انسان‌، به پرده‌برداري از جايگاه اين مولكول‌ها در آسيب‌شناسي سرطان و نقش آن‌ها به عنوان اجزاي مهم در توموزايي، كمك شاياني نموده است. هدف از انجام اين پژوهش بررسي تغيير بيان lncRNA-هاي GHET1 و CCAT1 بعد از تيمار سلول سرطان معده با سم انتروتوكسين B باكتري استافيلوكوكوس اورئوس مي‌باشد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه‌ي تجربي، سازواره‌ي ژني pcDNA3.1(+)-SEB پس از تكثير در باكتري E.coli سويه‌ي TOP10F و استخراج، به روش ليپوفكشن وارد سلول‌هاي رده‌ي AGS شد و پس از تيمار با آنتي‌بيوتيك نئومايسين (600 ميكروگرم در ميلي ليتر)، RNA سلولي استخراج و cDNA ساخته شد. سپس براي lncRNAهاي GHET1 و CCAT1 واكنش real time RT-PCR انجام شد. يافته‌ها: نتايج به دست آمده حاكي از آن است كه پس از واكنش ليپوفكشن و ورود پلاسميد درون سلول ها و همچنين سنتز cDNA، كاهش بيان lncRNA هاي CCAT1 و GHET1 تحت تاثير بيان ژن سم، در سطح معناداري بوده است. به اين صورت كه در مقايسه با سلول AGS كه ژن SEB را دريافت نكرده بودند، سلول‌هاي حاوي ژن سم كاهش بيان بيشتري نشان دادند. نتيجه‌گيري: با توجه به كاهش بيان lncRNAهاي نامبرده، به نظر مي رسد سم انتروتوكسين B باكتري استافيلوكوكوس اورئوس با بيان در سلول‌هاي سرطان معده سبب تغيير بيان lncRNA هاي GHET1 و CCAT1 در اين رده سلولي مي شود.

Background and Aim: Historically, gastric adenocarcinoma has been one of the major causes of cancer deaths in the world. Enterotoxin B is one of the largest superantigenes and is considered as an invasive molecule and has also played an important role in inducing apoptosis in various cancers. The purpose of this study was to investigate the changes in the expression of lncRNAs from GHET1 and CCAT1 after gastric cancer treatment with enterotoxin B poison. Materials and Methods: In this experimental study, the pcDNA3.1 (+) - SEB gene after amplification of E. coli strain TOP10F and extracted from E. coli strain was introduced into AGS cells by lipofection method. After treatment with antibiotic neomycin, cellular RNA CdNA extraction was made. Then, real time RT-PCR reaction was performed for lncRNAs of GHET1 and CCAT1. Results: The results showed that decreasing the expression of CCAT1 and GHET1 lncRNAs after the effect of enterotoxin was significant. Compared to the AGS cell that did not receive the SEB gene, the cells containing the enterotoxin gene were more likely to go to apoptosis. Conclusion: enterotoxin B induced apoptosis in this cell line by expression in gastric cancer cells.