ارزيابي تغييرات بيان كمي ژن MUC2 تحت تاثير مكمل سازي جيره با سطوح مختلف آلفاتوكوفول استات، تيموكوئينون وسيزامين در بلدرچين هاي ژاپني گوشتي و تخم گذار

Evaluation of the quantitative expression changes of MUC2 gene under the influence of diet supplementation with different levels of alpha tocopherol acetate, thymoquinone and sesamin in broiler and laying Japanese quails

مقدمه و هدف: به منظور ارزيابي تغييرات بيان كمي ژن MUC2 تحت تاثير مكمل سازي جيره با آلفاتوكوفول استات، سيزامين و تيموكوئينون در بلدرچين هاي ژاپني گوشتي و تخم گذار از 6 تيمار آزمايشي شامل گروه شاهد (بدون مكمل سازي) و گروه‌هاي مصرف‌كننده جيره‌هاي مكمل شده با سطوح 100 و200 ميلي‌گرم در هر كيلوگرم خوراك از تركيبات آلفاتوكوفول استات، تيموكوئينون و سيزامين استفاده شد. روش كار: نمونه هاي منجمد شده در نيتروژن مايع كه در سنين 35 روزگي و 85 روزگي نمونه‌هايي از ژوژنوم دو قطعه بلدرچين ذبح شده جمع‌آوري شده بودند به منظور بررسي بيان كمي ژن MUC2 با استفاده از كيت استخراج RNA ساخته شده توسط شركت فرمنتاز مورد استفاده قرار گرفتند. ارزيابي كيفيت و كميت RNA با استفاده از اسپكتروفوتومتر نانودراپ ترمو انجام شد. سپس ساخت cDNA با استفاده از كيت ساخت شركت فرمنتاز و ارزيابي، رقيق‌سازي و همسان‌سازي آن به صورت300 نانوگرم بر ميكروليتر صورت‌گرفت. در ادامه mRNA موجود با استفاده از RT-PCR و با استفاده از كيت سايبرگرين اندازه‌گيري شد. براي انجام آناليز بيان ژن، پس از مراحل استخراج RNA و حذف باقي‌مانده‌هاي DNA ژنومي، اقدام به ساخت cDNA به‌عنوان الگوي اوليه براي واكنش‌هاي RT-PCR شد. تعيين كميت نسبي در RT-PCR به‌وسيله افزايش تشعشع نور فلورسنت در نتيجه اتصال رنگ سايبرگرين صورت پذيرفت و مقادير مربوط به چرخه آستانه (Ct) حاصل از تكرارهاي زيستي و تكنيكي هر تيمار براي محاسبه ميزان بيان كمي ژن MUC2 در بافت روده بلدرچين‌هاي مورد مطالعه ثبت گرديد. ميانگين Ct، براي تكرارهاي تكنيكي ژن MUC2 و β-actin محاسبه شد ونهايتاً ميزانCT∆ توسط كسر (Ct) هدف و (Ct) مرجع برآورد و بيان كمي ژن MUC2 محاسبه گرديد. يافته ها: نتايج اين مطالعه نشان دهنده افزايش معني‌دار بيان كمي mRNA ژن MUC2 تحت تأثير مصرف سطوح 100 و 200 ميلي‌گرم آلفاتوكوفول استات، تيموكوئينون و سيزامين در بلدرچين هاي ژاپني گوشتي و تخم گذار بود (05/0≥p). نتايج بررسي مقايسه ميانگين ها بين اعمال مكمل‌سازي سطوح 100 و 200 ميلي‌گرم آلفاتوكوفول استات، تيموكوئينون و سيزامين نشان‌دهنده وجود اختلافات معني‌دار آماري در بين گروه‌هاي مصرف‌كننده سطوح يكسان از آلفاتوكوفول استات، تيموكوئينون و سيزامين در بلدرچين هاي ژاپني گوشتي و تخم گذار تحت آزمايش بود (05/0≥p). نتيجه گيري: به طور كلي نتايج اين مطالعه نشان دهنده افزايش بيان كمي ژن MUC2 تحت تاثير مصرف جيره‌هاي مكمل‌شده با سطوح مختلف آلفا توكوفرول استات، سيزامين و تيموكوئينون بود و احتمالا مكمل سازي جيره با تركيبات فوق به وسيله تحريك انتخابي رشد و بهبود فعاليت باكتري هاي مفيد دستگاه گوارش با حفاظت از پرزهاي روده و افزايش تراكم سلول‌هاي جامي منجر به ايجاد تغييرات ديناميكي در ترشح موسين و ويسكوزيته موكوس و بيان كمي ژن MUC2 در بلدرچين هاي گوشتي و تخم گذار مورد آزمايش شد.

Background: The aim of current study was to investigate the effect of dietary alpha tocopherol acetate, sesamin and thymoquinone supplemented diets on of MUC2 gene expression in broiler and laying Japanese quails. Materials and Methods: Experimental treatments whereas a control group and alpha tocopherol acetate, thymoquinone, and sesamin supplemented diets at levels of 100 and 200 mg/ kg. Evaluation of RNA quality and quantity was done using thermo nanodrop spectrophotometer. Then cDNA production was done using the kit made by Fermentase company and its evaluation, dilution and homogenization was done in the form of 300 ng per microliter. Then the available mRNA was measured using RT-PCR and using the Cyber Green kit. To perform gene expression analysis, after RNA extraction and removal of genomic DNA residues, cDNA was made as the initial template for RT-PCR reactions. Determination of the relative quantity in RT-PCR was done by increasing the fluorescent light radiation as a result of the binding of cyber green dye and the values related to the threshold cycle (Ct) obtained from the biological and technical repetitions of each treatment to calculate the quantitative expression of the MUC2 gene in the intestinal tissue of the broiler and layer experimental quails. The average Ct was calculated for the technical repetitions of MUC2 and β-actin gene, and finally, the amount of CT∆ was estimated by the fraction (Ct) of the target and (Ct) of the reference and the quantitative expression of the MUC2 gene was calculated. Results: The results showed that under the influence of 100 and 200 mg/ kg of alpha tocopherol acetate, thymoquinone and sesamin, the MUC2 mRNA gene expression was increased in broiler and layer Japanese quals. Conclusion: Overall, the results of the study showed that the beneficial effects of alpha tocopherol acetate, thymoquinone and sesamin supplemented diets m-RNA expression of MUC2 in broiler and laying Japanese quails. Probably, supplementing the quail’s diet with the above compounds by selectively stimulating the growth and improving the activity of beneficial bacteria in the digestive tract by protecting the intestinal villi and increasing the density of goblet cells leads to dynamic changes in mucin secretion and mucus viscosity and better quantitative expression of the MUC2 gene in broiler and laying quails.