بررسي ميزان lncRNA هاي GHET1 و CCAT1 در سلول ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب pcDNA3.1(+)-Alpha-toxin

Investigating the amount of lncRNAs GHET1 and CCAT1 in cells transfected with the recombinant vector PCDNA3.1(+)-Alpha-toxin

زمينه و هدف: معده به عنوان بخشي از اندام گوارشي در هنگام سرطاني شدن از عامل‌هاي مهم مرگ و مير مي‌باشد. سم آلفاتوكسين توسط باكتري استافيلوكوكوس اورئوس توليد مي‌شود. RNAهاي غيركدكننده بلند، بخش وسيعي از بخش‌هاي غيركد كننده پروتئين ژنوم انسان را در بر مي‌گيرند كه در هموستازي، اتصال و شكل‌دهي به ساختار ژنوم اثر مي‌گذارند. دو نوع lncRNA، GHET1 و CCAT1 در اثر القاي آپوپتوز كاهش مي‌يابند. هدف بررسي اثرات ژن آلفاتوكسين باكتري استافيلوكوكوس اورئوس بر بيان lncRNAهاي GHET1 و CCAT1 در سلول هاي رده AGS ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب pcDNA3.1(+)-Alpha-toxin به روشtime RT-PCR Realمي باشد. مواد و روش: در اين مطالعه ابتدا با ساخت وكتور نوتركيب حاوي ژن آلفاتوكسين و ترانسفورماسيون آن در سلول مستعد باكتري E.coli و تخليص‌سازي آن از اين باكتري آغاز شد. در ادامه براي ترانسفكت سلول هاي AGS با وكتور نوتركيب، از روش ليپوفكشن بهره گرفته شد. استخراج RNA و سنتز cDNA از سلول هاي ترانسفكت شده انجام شد. در نهايت Real time RT-PCR به‌منظور بررسي تغيير بيان lncRNAهايGHET1 و CCAT1 انجام شد. نتايج: سلول‌هاي حاوي وكتور نوتركيب در محيط كشت حاوي آنتي بيوتيك نئومايسين رشد مي‌كنند. كه بر اساس داده‌هاي Real time RT-PCR بيان lncRNA هاي CCAT1 و GHET1 به طور معني داري در سلول سرطاني كاهش يافته است. نتيجه گيري : نتايج نشان داد، ژن سم Alpha-toxin موجب اثرات ضد سرطاني مي گردد و با كاهش بيان lncRNA هاي ذكر شده، مي‌تواند سلول را به سمت آپوپتوز هدايت كند.

Background and purpose: The stomach, as a part of the digestive organ, is one of the important factors of mortality when it becomes cancerous. Alpha-toxin is produced by Staphylococcus aureus bacteria. Long non-coding RNAs comprise a large part of the non-protein-coding parts of the human genome which affect homeostasis and connection and shaping of the genome structure. Two types of lncRNAs, GHET1 and CCAT1, are decreased due to induction of apoptosis. The aim of the effects of the Staphylococcus aureus Alpha-toxin gene on the expression of GHET1 and CCAT1 lncRNAs in AGS cells transformed with the new pcDNA3.1(+)-Alpha-toxin vector by Real time RT-PCR method. Materials and methods: This study, starts with the construction of the recombinant vector containing female Alpha-toxin and its transformation in the susceptible cell of E.coli bacteria and its purification from this bacterium. In the continuation of this article, to transfect AGS cells with the recombinant vector, the lipofection method was used. RNA extraction and cDNA synthesis were performed from transfected cells. Finally, Real time RT-PCR was performed to investigate the expression changes of GHET1 and CCAT1 lncRNAs. Results: The cells containing the recombinant vector grow in the culture medium containing the antibiotic neomycin. According to Real time RT-PCR data, the expression of lncRNAs CCAT1 and GHET1 has decreased significantly compared to cancer cells. Conclusion: The results show that the Alpha-toxin gene causes anti-cancer effects and by reducing the expression of the mentioned lncRNAs, it can lead the cell toward apoptosis.