بررسي بيان ژن رمز كننده ي HSP19.9 در هيبريدهاي كرم ابريشم در پاسخ به شوك حرارتي

Study of gene expression of HSP 19.9 in the response to heat shock of silkworm hybrids

بررسی ها اثر معنی دار ژنوتیپ را در بیان ژن های رمز كننده ی پروتئینهای شوك حرارتی كرم ابریشم نشان داد. در كرم ابریشم هیبریدهای تجارتی از تلاقی دو واریتهی متفاوت تولید و عرضه می شود. به منظور مقایسه ی كمیت بیان ژن پروتئین شوك حرارتی 19.9 (HSP19.9) در چهار هیبرید تجارتی كرم ابریشم كه در آخر تابستان پرورش داده شدند از روش qRT- PCR استفاده شد. RNA نمونه ی گروه های شاهد و نمونه های تیمارهای حرارتی 45 درجه به مدت 35 دقیقه، پس از استخراج به cDNA تبدیل شدند. بروز ژن HISP19.9 پس از استاندارد كردن با ژن مرجع RPL27a و بر اساس مقایسه با گروه شاهد (دارای هر دو ژن هدف و مرجع) اندازه گیری شد. میزان بیان ژن HSP19.9 در بافت چربی كرم ابریشم در چهار هیبرید: 104×103 ، 107x110 ،104x103 و 110x107 در چهار زمان: صفر(بلافاصله بعد از شوك حرارتی)، دو، چهار و 24 ساعت پس از اولین شوك حرارتی محاسبه گردید. آنالیز واریانس نشان داد كه بروز این ژن در تمامی هیبریدهای مذكور تفاوت معنی دار با یكدیگر دارند (0/0001>p)، بیشترین میزان بیان ژن در هیبرید 107x110 و كمترین مقدار بروز آن در هیبرید 103×104 بود. از دیگر نتایج تجزیه ی آماری، تفاوت معنی دار بین تمامی زمان های شوك حرارتی است، به طوری كه دو ساعت پس از شوك حرارتی بیشترین میزان بروز ژن را نشان داد. این نتایج نشان داد كه تفاوت هیبرید های كرم ابریشم از نظر بیان ژن FISP19.9 حتی بین آمیزش های مستقیم و معكوس زیاد بوده و می تواند اثر ژنوتیپ را در بروز این ژن ها تأیید نماید و تغییرات آن در واریته ها و هیبریدهای كرم ابریشم می تواند برای برنامه ریزی توزیع هیبریدهای كرم ابریشم در مناطق مختلف كشور مورد توجه قرار گیرد.

The other reports showed the gentic effect on the gene expression of heat shock protein of silkworm (Bombyx mori). The commercial silkworm hybrids produce from crossing of two different silkworm varieties. Gene expression of small heat shock protein 19.9 (HSP19.9) in four commercial silkworm hybrids reared in the late summer was quantified by qRT-PCR method. Extracted RNA samples of control and heat treated groups exposed to 45 °C for 35 minutes were reverse transcribed to cDNA. Gene expression of HSP 19.9 was measured after adjusting with reference genes RPL27a and comparing with control group (in both target and reference genes). The HSP19.9 of silkworm fat body was studied in the four hybrids of 103×104, 104×103, 107×110 and 110×107 in the time zero, two, four and 24 hours after heat shock. ANOVA showed that the gene expression in all hybrids was different significantly(p<0.0001). The highest and the lowest gene expression was related to 110×107 and 103×104 hybrids respectively. Statistical analysis also showed significant differences between times of sampling so that the peak of expression was two hours after heat shock This results showed differences between gene expression of silkworm hybrids are high even between direct and reciprocal crosses which may confer the genetic effect on the HSPs expression. The variation between varieties may help programmers to choice these hybrids for different regions of our country