كلونينگ و آناليز مولكولي ژن ليپاز خارج سلولي مخمر يا روويا ليپوليتيكا

آنزیم لیپاز مخمر باروویا لیپولیتیكا، آنزیم مهمی در بیوتكنولوژی دارویی، غذایی و محیطی است. هدف این تحقیق كلونینگ ژن لیپاز خارج سلولی از سویه های طبیعی DSM3286 و جهش یافته U6 مخمر باروویا لیپولیتیكا در باكتری اشریشیا كلی و سپس تجزیه و تحلیل مولكولی این ژن ها است. ژن لیپاز خارج سلولی نوع دو(LH2) از مخمر باروو یا لیپولیتیكا سویه DSM3280 و جهش یافته اش مخمر باروویا لیبیولیتیكا سویه U6 جداسازی و با حامل در باكتری اشریشیا كلی كلون گردید. چارچوب خوانش باز(ORF) ژن لیپاز خارج سلولی طبیعی و جهش یافته به منظور آنالیز و یافتن اختلاف بین توالی های نوكلئوتیدی تعیین توالی شد. نوكلئوتید سیتوزین (C) در جایگاه 362 با نوكلئوتید تیمین (T) و نوكلثوتید آدنین (A) در جایگاہ 385 بانوكلئوتید تیمین (T) در ORF ژن LIP2بارووالیپوایتیكا سویه جهش یافته U6 در مقایسه با سویه طبیعی جایگزین شدند. در این تحقیق تغییرات ژنتیكی در ناحیه ORF ژن LIP2 سویه جهش یافته باروو یا لیپولینیكا تولید كننده لیپاز خارج سلولی در مقیاس بالایی و صنعتی مشخص شد. نتایج این تحقیق می تواند برای یافتن اهداف مناسب برای مهندسی متابولیك معكوس و جهش زایی در جایگاه مشخص به منظور تولید آنزیم لیپاز خارج سلولی در مقیاس زیاد و پایدار در مخمر باروو یا لیبیولیتیكا و سایر مخمرها به كار رود.

The lipase enzyme of the yeast Yarrowia lipolytica is an important enzyme in pharmaceutical, food and environmental biotechnology. The aims of the study were to clone extracellular lipase gene from DSM3286 native and U6 mutant strains of Y. lipolytica in Escherichia coli and then molecular analysis of these genes. The LIP2 gene of Y. lipolytica DSM3286 and its mutant Y. lipolytica U6 were isolated and cloned by vector in E. coli. The native and mutant extracellular lipase ORFs were sequenced in order to further analysis and find the difference in the nucleotide sequences. The C nucleotide at the position 362 substituted with T nucleotide and A nucleotide at the position 385 substituted with T nucleotide in the extracellular lipase LIP2 ORFs of Y. lipolytica U6 mutant strain compared with the native strain. In this study, the LIP2 ORF region genetic changes were found in the industrial and high-level extracellular lipase producer Y. lipolytica mutant strain. Results of this study could be use to find suitable targets for inverse metabolic engineering and site-directed mutagenesis to achieve stable and highlevel extracellular lipase production in Y. lipolytica and other yeasts