همسانه سازي و بيان ژن trt رمز كننده آنزيم وارونوشتاز از باكتري گرما دوست Geobacillus stearothermophilus starin10.

فرایند وارونویسی و به دنبال آن ازدیاد DNA تكنیك مولكولی قدرتمندی در مطالعه RNA بوده و كارایی این فرایند به مقدار زیادی به ویژگی های مولكولی وارونوشتاز مورد استفاده وابسته است.سنتز cDNA در دماهای بالا دارای مزایای زیادی بوده و وارونوشتاز مقاوم به حرارت در تولید full- length cDNA بسیار مفید و ضروری می باشد. در این پژوهش ژن موسوم به trt از ژنوم باكتری ترموفیل Geobacillus stearothermophilus strain 10 جداسازی شد.این ژن رمز كننده یك (open reading frame(ORF) مشابه ORF های رمز شونده توسط اینترون های گروه II باكتریایی میباشد. ژن مورد نظر ابتدا در ناقل pTZ57R/T همسانه سازی شد و پس از تعیین ترادف و اطمینان از صحت ژن مورد نظر ، قطعه ژنی با انتهای چسبنده در ناقل بیانی pET-28a همسانه سازی شده و پروتئین Trt در میزبان Escherichia coli بیان شد.

Reverse transcription coupled with DNA amplification has become a powerful molecular technique for studying ribonucleic acids. The efficiency of these reactions is largely dependent on the molecular properties of currently used reverse transcriptases. Synthesizing cDNA at higher temperatures, have several advantages and heat-stable reverse transcriptases are an essential and widely used tool in the synthesis of fulllength cDNAs. In this study a gene,designated trt,is isolated from the genome of the thermophilic bacterium Geobacillus stearothermophilus strain 10. The gene codes for an open reading frame (ORF) similar to the ORFs encoded by group II introns found in bacteria. The gene was cloned in plasmid pTZ57R/T and after sequencing to verify its identity, was subcloned in plasmid pET28a and Trt protein overexpressed in Escherichia coli