كلونينگ اينترفرون لامبدا-1 (اينتركولين-29) انساني از سلول هاي دندريتيك مشتق از مونوسيت و بيان آن در سلول هايHEK293T يوكاريوتي

Cloning of human IFN-λ1 (IL-29) from monocyte derived DCs and its expression in HEK 293 T

زمينه و هدف: اينترفرون‌هاي نوع سه داراي سه ليگاند مي باشند: IFN-λ1(IL-29)، IFN-λ2(IL-28A) و IFN-λ3(IL-28B) كه اين سه ليگاند، گيرنده هترودايمر منحصر به فرد يكساني را بكار مي برند كه از زنجيره‌هاي CRF2-12 (IFN-λ-R1/IL-28Ra) و CRF2-4(IL10-R-b) تشكيل يافته است. اينترفرون‌هاي لامبدا چندين خصوصيت از جمله فعاليت‌هاي ضد ويروسي، ضد تكثيري، ايمونومدولاتوري و فعاليت ضد توموري در in vivo را نشان مي دهند. هدف اين مطالعه كلون كردن ژن IFN-λ1 بدست آمده از سلول‌هاي دندريتيك و بررسي توليد پروتئين آن در حامل بياني يوكاريوتي مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه آزمايشگاهي، RNA تام از سلول‌هاي دندريتيك مشتق شده از مونوسيت تحريك شده با صد ng/ml از LPSاستخراج گرديد. cDNA از RNA كل سنتز شد. سپس cDNA مربوط به IFN-λ1 با پرايمرهاي اختصاصي توسط PCR تكثير و در داخل حامل PTZ57R/Tدر اشرشياكلي سويه DH5α كلون شد. سپس با استفاده از اندونوكلئازهاي محدودالاثر KpnI و BamHI به داخل پلاسميد pcDNA3.1+ ساب كلون شد. بعد از انتقال به HEK293T، بيان پروتئين توسط روش ELISA ساندويچي تاييد شد. نتايج: توالي DNA وارد شده مشابه با توالي كد كننده IFN-λ1 موجود در Gene Bank بود. ژن IFN-λ1 در سلول هاي ترانسفكت شده رونويسي و بيان آن در سلول هاي HEk293T توسط اليزاي ساندويچي تأئيد گرديد. نتيجه گيري: كلونينگ و بيان موفق IFN-λ1 مي‌تواند نخستين گام براي توليد و تحقيقات بيشتر درباره فعاليت‌هاي اين سايتوكاين و فراهم آوردن زمينه هاي تحقيقاتي براي كسب روش‌هاي درماني جديد براي سرطان، عفونت هاي ويروسي، بيماري‌هاي خود ايمني و آلرژي و طراحي واكسن‌هاي مؤثرتر بكار رود.

Background: Type III Interferon (IFN) is a novel member of the interferon family, which contains three ligands: IFN-λ1 (IL-29), IFN-λ2 (IL-28A) and IFN-λ3 (IL-28B).These three ligands use the same unique heterodimeric receptor composed of CRF2-12 (IFN-λ-R1/IL-28Ra) and CRF2-4 (IL10-R-b) chains which are completely different from type I & type II IFN receptors. IFNsλ exhibit several features such as antiviral activity, antiproliferative activity, immunomodulatory activity and in vivo antitumour activity. In this work we aimed to clone the ogene of IFN-λ1 obtained from dendritic cells and assess protein production in eukaryotic expression vector. Materials and methods: in thid experimental study, total RNA was extracted from monocyte derived dendritic cells stimulated with 100 ng/ml of LPS. cDNA was synthesized from total RNA .Then cDNA of IFN-λ1 was amplified by PCR with specific primers and cloned into the PTZ57R/Tvector in the E.coli (DH5α). This was subsequently subcloned into plasmid pcDNA3.1+, using KpnI and BamHI restriction endonucleases. After tranfection into HEK293 T, expression of protein was tested by sandwich-ELISA method. Results: The DNA sequence of the insert was identical to the published sequences encoding IFN-λ1 in GeneBank. It was demonstrated that IFN-λ1 gene was markedly transcribed in transfected cells. Expression of IFN-λ1 in HEK293 T cells was confirmed by sandwich ELISA. Conclusion: Successful cloning and expression IFN-λ1 can be the first step for more production and further investigation about other activities of this cytokine and provides grounds for research on obtaining new therapeutic approaches for cancer, viral, autoimmune and allergic disease and designing more effective vaccines.