روش تشخيص سريع‌تر عفونت ليشمانيا با استفاده از تكنيكPCR و FLASH PCR

Fast Method for Diagnosis of Leishmania by PCR and FLASH PCR

زمينه وهدف: ليشمانيوز يك بيماري انگلي تك ياخته‌اي است كه به عنوان يك معضل بهداشتي در بسياري از كشورها مطرح است.هدف از اين مطالعه، تشخيص عفونت انگل در انسان به منظور شناسايي اپيدميولوژيك و ارائه برنامه كنترل با استفاده از پرايمر اختصاصي مشترك طراحي شده در سه گونه ليشمانيا است. مواد و روش‌ها:30 نمونه ايزوله شايع انگل ليشمانيا از مراكز مختلف در ايران جمع آوري شد. DNA اين ايزوله‌ها پس از كشت در محيط Rpmi1640 استخراج و ژن ITS2-rRNA با استفاده از PCR تكثير يافت. امپليكون‌ها توسط الكتروفورز در ژل آگارز 2 درصد مورد بررسي قرار گرفتند. از روش FLASH PCR نيز، يك پروب اختصاصي و رنگ فلورسانس به منظور بررسي وجود يا عدم وجود امپليكون به كار گرفته شد. يافته‌ها: نتايج حاصل از روش‌هايPCR و FLASH PCRنشان مي‌دهند اين دو روش داراي دقت و حساسيت قابل قبولي براي شناسايي ليشمانيا هستند. نتيجه‌گيري: تعيين آلودگي انگل ليشمانيا با استفاده از جفت پرايمر اختصاصي موفقيت‌آميز بود و روش TaqMan مي‌تواند يكي از حساس‌ترين روش‌هاي تشخيصي براي شناسايي كيفي انگل در ناحيه‌ي ITS2 ليشمانيا باشد.

Background: Leishmaniasis is a protozoan parasitic disease and a global health problem. The aim of this study is to diagnose the parasitic infection in humans for epidemiological identification and providing control programs using proprietary co-designed primers in three species of Leishmania. Materials and Methods: 30 common Leishmania isolates were gathered from different centers in Iran. Having been cultured in RPMI-1640 Medium, DNA was extracted and the gene ITS2-rRNA was amplified by PCR. The amplicons were examined by electrophoresis on agarose gel 2%. Also, in FLASH PCR method, a specific probe and florence colour were used to investigae the amplicon existence on sample. Results: The results of the investigations by PCR and FLASH PCR methods show that these methods are sensitive and specific for diagnosis of Leishmania Conclusion: In this study, identification of Leishmania parasite using specific primer pairs was successful and TaqMan could be one of the most sensitive diagnostic methods to identify parasite load for the ITS2 region of Leishmania.