مرگ سلولي در نورون‌هاي حركتي قطعات كشت شده نخاع موش بالغ

Cell death in motor neurons of cultured spinal cord slices in adult mouse

چكيده مقدمه: كشت قطعات نخاع گرفته شده از پستانداران بالغ مي‌تواند به عنوان يك مدل آزمايشگاهي مناسب جهت ارزيابي قابليت حيات سلولي، بررسي آسيب‌هاي نخاعي و مكانيسم‌هاي دخيل در مرگ سلولي در نظر گرفته شود. در پژوهش حاضر قطعات نخاع موش بالغ مورد استفاده قرار گرفت تا به بررسي نحوه مرگ نورون‌هاي حركتي در قطعات كشت شده بپردازد. روش كار: طي يك مطالعه تجربي- آزمايشگاهي حاضر ناحيه سينه‌اي نخاع 4 موش‌ بالغ Balb/c توسط دستگاه قطعه كننده بافت به قطعات 400 ميكروني بريده و اين قطعات براي دوره‌هاي زماني متفاوت كشت و در انكوباتور دي‌اكسيدكربن دار در درجه حرارت 37 درجه سانتي‌گراد انكوبه شد. سپس قطعات تازه تهيه شده (لحظه زماني صفر) و قطعات كشت شده فيكس و توسط كرايوستت برش‌گيري شد. براي مطالعه جنبه‌هاي مورفولوژيكي و بيوشيميايي مرگ سلولي، از روش‌هاي رنگ آميزي فلئورسنت، تكنيك تانل و الكتروفورز ژل آگارز استفاده شد. نتايج: در نورون‌هاي حركتي قطعات تازه تهيه شده هيچ گونه آثار آپوپتوزيس مشاهده نشد، در حالي كه 6 ، 12 و 24 ساعت پس از كشت، اين نورون‌ها نشانه‌هاي آپوپتوزيس شامل چروكيدگي سلول، متراكم شدن هسته و كروماتين را به نمايش گذاشتند. هم‌چنين 6 و 12 ساعت پس از كشت تانل مثبت بودند. علاوه بر آن DNA استخراج شده از قطعات كشت شده براي 24 ساعت فراگمنت‌هاي نوكلئوزومي DNA را برروي ژل آگارز نشان داد. نتيجه گيري: نتايج مويد وقوع آپوپتوزيس در نورون‌هاي حركتي قطعات كشت شده نخاع موش بالغ مي باشد.

Abstract Background: Spinal cord slices culturing from adult mammals could be considered as a suitable in-vitro model for evaluating cellular viability, spinal cord injury and cell death mechanisms. In present study, determining of cell death in motor neurons of cultured spinal cord slices in adult mouse was done. Materials and Methods: In a experimental- laboratory study, thoracic regions of spinal cords from 4 Balb/c mice were cut into 400-µm slices using tissue chopper and incubated in a Co2 incubator at 37˚C for different periods of time. Freshly prepared slices (0h) and cultured slices were fixed and sectioned using cryostat. To study morphological and biochemical features of cell death, fluorescent staining, TUNEL method and agarose gel electrophoresis were used. Results: In freshly prepared slices of motor neurons showed no apoptotic changes. While, 6, 12 and 24h after culturing, this neurons displayed morphological features of apoptosis including cell shrinkage as well as nuclear and chromatin condensation. Also, 6 and 12h after culturing were TUNEL positive. In addition, extracted DNA from cultured slices for 24h were indicated the nucleosomal DNA fragmentation on agarose gel electrophoresis. Conclusion: Results were showed the occurrence of apoptosis in motor neurons of cultured adult mouse spinal cord slices.