بررسي كارائي سه روش مختلف استخراج DNA بروسلا در نمونه هاي سرم انسان

Evaluation of three DNA extraction methods for detection of brucella DNA in human serum samples

زمينه و هدف: بروسلوز انساني در بسياري از كشورهاي جهان از جمله ايران، يك مشكل اساسي بهداشت جامعه ميباشد. ابداع روشهاي جديد تشخيصي كه داراي حساسيت بالايي بوده و خطر عفونت در پرسنل آزمايشگاه را به حداقل برساند، از اهميت زيادي برخوردارميباشد. از جمله روشهايي كه اين مزايا را دارد، واكنش زنجيرهاي پليمراز (PCR) است. با وجود اين كارايي PCR تا حد زيادي به روشهاي استخراج DNA وابسته ميباشد. ما در اين مطالعه، كارايي سه روش مختلف استخراج DNA باكتري بروسلا در سرم را مورد بررسي قرار داده ايم. مواد و روشها: در اين مطالعه تجربي، ابتدا از باكتري بروسلا، سوسپانسيون ميكروبي در سرم فيزيولوژي تهيه گرديد كه معادل كدورت نيم مك فارلند بود. نمونههاي سرم انسان به طور مصنوعي با غلظتهاي مشخصي از باكتري بروسلا تلقيح شدند. با سه روش متفاوت،DNA استخراج شد و با PCRاختصاصي جنس بروسلا مورد آزمايش قرار گرفت. يافتهها: يافتههاي ما نشان داد كه پروتكل كيت سيناژن در مقايسه با دو روش ديگر در رقتهاي پايينتري از DNA بروسلا قادر به رديابي DNA اين باكتري در سرم ميباشد. كيت سيناژن توانست DNA باكتري را در رقت ده برابر كمتر در مقايسه با دو روش ديگر رديابي نمايد. نتيجه گيري: با توجه به نتايج حاصل از اين مطالعه كيت سيناژن روش ارجح در استخراج بوده و داراي حساسيت بهتر براي جداسازي DNA بروسلا از نمونههاي سرم ميباشد.

Background: Human brucellosis is a significant public health concern in many countries, including Iran. Therefore, the development of new diagnostic techniques, with high sensitivity and minimum risk of laboratory infection are of great importance. PCR is one of the procedures which has these advantages. However, PCR efficiency is largely dependent on DNA extraction methods. In this study, we studied the efficiency of three different extraction methods of brucella DNA in serum samples. Materials and Methods: In this experimental study, microbial suspensions were initially prepared in saline that its turbidity was equivalent to 0.5 McFarland. Human serum samples were spiked with certain concentrations of Brucella melitensis in vitro. DNA was extracted by three methods and tested by a genus-specific PCR method. Results: Our results showed that the cinneagen kit protocol detected brucella DNA in lower serum concentrations compared with the other protocols. Cinnagen kit could detect brucella DNA in ten-fold dilution in comparison with the other two methods. Conclusion: According to the findings of this study, cinnagen kit was the preferred assay method that yields a better sensitivity for isolation of brucella DNA in serum samples.