مطالعه ي ساختار جمعيتي قارچ Gnomonia leptostyla عامل بيماري آنتراكنوز گردو در استان آذربايجان شرقي به روش PCR-RFLP

Investigation on the genetic structure of Gnomonia leptostyla populations by PCR-RFLP in Azarbayejan-e-Sharqi, Iran

بيماري آنتراكنوز گردو يكي از مهمترين عوامل مهم خسارت زا به درختان گردو در نواحي مختلف دنيا و شايع‌ترين بيماري درختان گردو در مناطق مختلف گردوكاري ايران از جمله استان‌هاي شمالي، كرمانشاه، آذربايجان، خراسان، سمنان و كرج مي‌باشد.در اين تحقيق طي سال‌هاي 84 و 85 نمونه‌هاي برگي آلوده از مناطق مختلف استان آذربايجان شرقي جمع آوري گرديد. 60 جدايه تك اسپور شده از قارچ عامل بيماري جهت مطالعه ساختار جمعيتي قارچ عامل بيماري بر اساس انگشت نگاري DNA به كمك تكنيك PCR-RFLP مورد مطالعه قرار گرفت. استخراج DNA قارچ با استفاده از روش Rapid Mini-Preparation از پودر ميسليومي قارچ انجام شد. براي انجام PCR از دو جفت آغازگر طراحي شده بر اساس توالي نوكلئوتيدي زير واحد 18s-SrDNA و ناحيه ITS ريبوزومي استفاده گرديد. قطعات تكثير شده تحت تأثير آنزيم هاي برشي قرار گرفتند. از بين آنزيم هاي اندونوكلئازي مورد استفاده، سه آنزيمDra I، Sma I و Bsu IIدر ناحيه SrDNAو آنزيم‌هاي Hinf I، Hind III در ناحيه ITS موفق به برش قطعات گرديدند. نتايج نشان داد كه از ميان قطعات برش داده شده توسط آنزيم هاي برشي، الگوي پديد آمده روي ژل آگارز براي كليه جدايه هاي مورد استفاده يكسان بوده و در حقيقت به نوعي همولوژي در ساختار جمعيتي اين قارچ مي‌توان تصور نمود.

Gnomonia leptostyla (Fr.) Ces. et de Not., the teleomorph of Marssonina juglandis (Lib.) Magn., is the causal agent of the walnut anthracnose, a wide spread disease in almost all the walnut growing areas and causes severe damages particularly in the north of iran such as Kermanshah, Azarbayejan, Khorasan and Karaj regions. Sampling was conducted from several areas of Azarbayejan-e-Sharqi province during 2005-2006. 60 Fungus isolates were isolated from samples and cultured as streaked single spore on OMA. Molecular techniques based on PCR-RFLP applied to investigate the genetic variability of G. leptostyla.Total DNA was isolated from mycelial powder by rapid mini-preparation method. A region of 60 isolates coding for the small-subunit ribosomal RNA (SrDNA-18s) and the internal transcribed spacer (ITS) were amplified and analyzed by restriction enzyme digestion. The results of PCR-RFLP showed no polymorphism either in length or in pattern among all the isolates tested.