بررسي ژنوتايپ محل اتصال hsa-miR-433-3P در ناحيه تنظيمي TYMS در نمونه‌هاي سرطان سينه

Gengenotypic Evaluation of Hsa-miR-433-3p Binding Site in the Regulatory Region of TYMS in Breast Cancer Patients

زمينه و هدف: سرطان سينه شايع­ترين سرطان در زنان سراسر جهان است. ارتباط اين بيماري با وقوع تغييرات در ژن­ هاي متعدد اثبات شده است. يكي از مسيرهاي مرتبط با سرطان سينه مسير بازجذب فولات است. آنزيم كليدي اين مسير پيام­رساني توسط ژن TYMS كد مي شود. miRNAها با اتصال به نواحي تنظيمي ژن ها بيان آن ها را كنترل مي­كنند. در اين مطالعه، وجود تغيير در ناحيه تنظيمي TYMS در ارتباط با ويژگي هاي دموگرافيكي (شامل گريد و متاستاز) بيماران سرطان سينه مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روش­ ها: در اين مطالعه ابتدا ناحيه تنظيمي ژن TYMS با كمك نرم افزارهاي بيوانفورماتيكي مرتبط، مورد بررسي قرار گرفت. پس از جمع آوري نمونه هاي سرطاني و استخراج DNAاز نمونه هاي خون، تغيير در ناحيه اتصال miRNA مورد مطالعه توسط برش آنزيمي NlaIII بررسي شد.يافته ­ها: بررسي­هاي بيوانفورماتيكي نشان داد كه محل اثر برخي از آنزيم هاي محدود كننده در 3'-UTR ژن TYMS مرتبط با ناحيه اتصال miRNAهايي از جمله Hsa-miR-433-3p قرار دارد. نتايج حاكي از صحت فرآيند تخليص ماده ژنومي، PCR و برش آنزيمي بود. در ناحيه تنظيمي مورد بررسي، ژنوتايپ هاي هوموزيگوت CC، هتروزيگوت AC و واريانت هوموزيگوت موتانت AA با فراواني متفاوت نسبت به نمونه هاي سالم مشاهده شد.(05/0 > p ، 4923/2 تا 7275/. : CI 95% ، 3465/1 : OR). هم­چنين ارتباط ژنوتايپ AA با گريد بالا و متاستاز از نظر آماري تاييد شد. نتيجه­ گيري: در مطالعات متعدد مشخص شده است برخي از پلي­مورفيسم ها در ژن هاي كليدي مرتبط با سرطان با تشخيص و پروسه درمان آن­ها ارتباط مستقيم دارد. با توجه به اهميت تشخيص به موقع در درمان سرطان، دستيابي به بيوماركرهاي تشخيصي در سرطان سينه در مراحل اوليه حائز اهميت خواهد بود. احتمالا تغيير نوكلئوتيدي در سايت اتصال miRNA مورد مطالعه مي تواند به عنوان بيوماركر تشخيصي تومور مورد استفاده قرار گيرد.

Background: Breast cancer is the most common cancer in women. It has been proven the association of cause of this disease with changes in several genes. One of the pathways associated with breast cancer is the folate reuptake pathway. The key enzyme of this pathway is coded by the TYMS gene. MicroRNAs control the expression of genes by binding to their regulatory regions. In this study, we evaluated changes in the regulatory region of TYMS gene with demographic characteristics (including the grade of cancer and metastasis) in breast cancer patients. Materials and Methods: In this study, the regulatory region of TYMS gene was investigated using related bioinformatics software. After collecting cancerous samples and DNA extraction from blood samples of normal and patients, change in the miRNA binding region by digestion with NlaIII enzyme was assayed. Results: Bioinformatics studies showed that the restriction site of some of the endonuclease enzymes in the 3'-UTR of the TYMS gene is related to the binding region of miRNAs, including Hsa-miR-433-3p. The results indicated the correctness of the genomic purification process, the PCR and enzymatic digestion reaction. In this study, in the regulatory region, CC homozygote, AC heterozygote and AA mutant homozygote variant had differences with control group (OR: 1.3465, %95 CI: 0.7275 to 2.4923, p<0.05). Also, the association of AA genotypes with metastasis and high grade of the patients was confirmed statistically. Conclusion: Studies have shown that some of polymorphisms in the key genes involved in cancer are directly related to their diagnosis and treatment process, and given the importance of timely diagnosis of cancer, the achievement of diagnostic biomarkers in breast cancer in the early stages will be important. Probably, the nucleotide change at the site of the microRNA binding site could be used as a diagnostic biomarker for degree of tumor progression.