مقايسه دو روش انتشار ديسك و ميكروپليت دايلوشن در بررسي اثرات ضدميكروبي عصاره برگ مورد بر استافيلوكوكوس آرئوس مقاوم به متي سيلين و اشرشياكلي ESBL

Comparison of Disk Diffusion and Micro-Dilution Broth Methods for Evaluation of Antimicrobial Effects of Myrtus Extract on Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus and Escherichia Coli ESBL

زمينه و هدف: اين مطالعه اثر عصاره گياه مورد بر روي 25 سويه دو گونه بيماري­زاي استافيلوكوكوس اورئوس مقاوم به متي­سيلين (MRSA) و اشرشيا كليESBL جدا شده از بيماران را با دو روش مقايسه نمود.مواد و روش­ ها: در اين مطالعه، 15سويه استافيلوكوكوس اورئوس مقاوم به متي­سيلين(MRSA) و ده سويه اشرشياكلي ESBL مورد استفاده قرار گرفتند. برگ گياه مورد به صورت تازه از مزرعه گياهان دارويي تهيه گرديد. عصاره­ گيري با استفاده از دستگاه رفلاكس به روش تقطير انجام شد. اثر غلظت­ هاي 100-195/0 ميكروگرم بر ميلي ­ليتر عصاره روي سويه ­ها، در روش انتشار ديسك در مقايسه با روش ميكروبراث دايلوشن با كدورت سنجي و نيز با روشMTT در دستگاه خوانش اليزا با طول موج 545 نانومتر مورد بررسي قرار گرفت. يافته­ ها: قطر هاله عدم رشد براي حداقل غلظت موثر 50 ميكروگرم بر ميلي ليتر، در سويه ­هاي مختلفESBL و MRSA به صورت ميانگين به ميزان 1±8 و 1 ±11 ميلي­متر بود. حداقل غلظت مهار رشد (MIC) 25/6 ميكروگرم برميلي­ليتر و حداقل غلظت كشندگي (MBC ) 5/12 ميكروگرم بر ميلي­ليتر براي اشرشيا كلي ESBLتعيين شد. به علاوه، حداقل غلظت مهار رشد (MIC) 5/12 ميكروگرم بر ميلي ­ليتر و حداقل غلظت كشندگي (MBC) 25 ميكروگرم بر ميلي ليتر براي استافيلوكوكوس اورئوس MRSA تعيين گرديد. نتيجه­ گيري: نتايج اين مطالعه عدم انطباق دقيق دو روش را در سويه­ هاي كلينيكي مقاوم به دارو اثبات نمود. اثبات گرديد كه روش انتشار ديسك، محدوده غلظت را مشخص نموده و روش ميكروپليت، غلظت موثر را با دقت تعيين مي­ نمايد. پيشنهاد مي­شود در مطالعات طب سنتي، روش انتشار در محيط جامد مبناي تصميم گيري قرار نگيرد. رفتار باكتري در محيط مايع و به­ ويژه تعيين نقطه مرگ، دقت نتايج را بسيار افزايش مي­ دهد.

Background and Aim: In this study, the effect of Myrtus extracts on 25 methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and Escherichia coli ESBL strains isolated from patients were compared by two methods. Materials and Methods: 15 methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and 10 Escherichia coli ESBL isolates were used in this study. Fresh Leaves of Myrtus were collected from the herbal medicine farm. Extraction was performed using a reflux distillation. The effect of concentrations 0.195-100 micrograms per ml of Myrtus extract on clinical isolates was analyzed in disk diffusion method compared with micro broth dilution method and with MTT in 545 nm on an ELISA reader apparatus. Findings: Inhibition zone diameter for the minimum effective concentration of 50 micrograms per milliliter in all isolates of ESBL and MRSA were as 8±1 mm and 11±1. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was 6.25mic/ml and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) was determined 12.5mic/ml for E. coli ESBL. Furthermore, the amounts for MIC and MBC was determined as 12.5 and 25 mic/ml, respectively for Staphylococcus aureus. Conclusion: The results of this study showed compliance of two methods in evaluation of drug-resistant clinical isolates. It was proved that the disk diffusion method could be determining range of effective concentration but micro broth method determines the effective concentration carefully. It is recommended that results obtained from disk diffusion not to be basis for final decisions in traditional medicine studies. Bacterial behavior in the broth and determination of the point of death greatly increases the accuracy of the results