عنوان مقاله :
ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ اﺛﺮ ﺳﻠﻮل ﻫﺎي ﺑﻨﻴﺎدي ﻣﺰاﻧﺸﻴﻤﻲ رت ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻻﻳﻪ ﺗﻐﺬﻳﻪ ﻛﻨﻨﺪه در ﺟﺪاﺳﺎزي و ﻛﺸﺖ ﺳﻠﻮل ﻫﺎي ﺑﻨﻴﺎدي ﺟﻨﻴﻨﻲ ﻣﻮش
عنوان به زبان ديگر :
Effects of rat mesenchymal stem cells as a feeder layer in isolation and culture of mouse embryonic stem cells
پديد آورندگان :
فرقاني، نسيم داﻧﺸﮕﺎه آزاد اﺳﻼﻣﻲ، واﺣﺪ ﻋﻠﻮم و ﺗﺤﻘﻴﻘﺎت ﺗﻬﺮان , كديور، مهدي اﻧﺴﺘﻴﺘﻮ ﭘﺎﺳﺘﻮر اﻳﺮان - ﺑﺨﺶ ﺑﻴﻮشيمي , يغمايي، پريچهر داﻧﺸﮕﺎه آزاد اﺳﻼﻣﻲ، واﺣﺪ ﻋﻠﻮم و ﺗﺤﻘﻴﻘﺎت ﺗﻬﺮان , كارگر، سعيده اﻧﺴﺘﻴﺘﻮ ﭘﺎﺳﺘﻮر اﻳﺮان - ﺑﺨﺶ ﺑﻴﻮشيمي , قاضي زاده، ليلي داﻧﺸﮕﺎه آزاد اﺳﻼﻣﻲ، واﺣﺪ ﻋﻠﻮم و ﺗﺤﻘﻴﻘﺎت ﺗﻬﺮان
كليدواژه :
سلول هاي ﺑﻨﻴﺎدي ﻣﺰاﻧﺸﻴﻤﻲ , ﺳﻠﻮل ﻫﺎي ﺑﻨﻴﺎدي ﺟﻨﻴﻨﻲ , ﻻﻳﻪ ﺗﻐﺬﻳﻪ ﻛﻨﻨﺪه
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: سلول هاي بنيادي جنيني سلول هاي پرتواني هستند كه از توده سلولي داخلي بلاستوسيست مشتق مي شوند. براي سلول هاي بنيادي جنيني اكثر گونه ها، لايه تغذيه كننده و سيتوكاين ها جزء الزامات كشت است. هدف اصلي از اين مطالعه، استفاده از سلول هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان رت به عنوان لايه تغذيه كننده در جداسازي و كشت سلو ل هاي بنيادي جنيني موش بود.
مواد و روش ها: ابتدا سلول هاي بنيادي مزانشيمي از مغز استخوان رت استخراج شده و در محيط DMEM و 10% سرم جنين گاوي كشت داده شدند. براي اطمينان از ماهيت مزانشيمي آن ها، سلول هاي كشت داده شده به مدت 21 روز در حضور مواد القا‌كننده تمايز به استخوان كشت شدند و در پايان اين مدت تمايز سلولي با رنگ آميزي اختصاصي بررسي شد. بلاستوسيست ها از موش هاي حامله نژاد Balb/c به دست آمدند و بر روي لايه تغذيه كننده MSC و محيط DMEM و 10% FBS كشت داده شدند. 2 روز بعد از كشت، زونا پلوسيدا خارج شد، سلول هاي چسبيده به لايه تغذيه كننده تريپسينه شده و توده سلولي داخلي به خوشه هاي كوچك چند سلولي تبديل شد. سپس توده هاي حاصل بر روي پليت هاي 12 خانه اي پوشيده شده با MSC ها قرار گرفت. هيچ گونه ماده رشد يا سايتوكاين به محيط اضافه نشد. 2-3 روز پس از پاساژ، كلوني هايي تشكيل شد كه بر اساس مورفولوژي به كلوني هاي ESCs شباهت داشتند. مطابق روش فوق، كلوني هاي حاصل تا دو بار ديگر بر روي MSC ها پاساژ داده شدند و نهايتاً ماهيت كلوني هاي رشد كرده حاصل از طريق بررسي هاي مورفولوژيك و نيز رنگ آميزي با آلكالين فسفاتاز مورد بررسي قرار گرفت.
يافته ها: در اين مطالعه سلول هاي بنيادي مزانشيمي به راحتي با استفاده از محيط DMEM كشت داده شدند. ماهيت مزانشيمي سلول هاي حاصل كه از لحاظ مورفولوژي، فيبروبلاستي بودند با تمايز به توده هاي استخواني و رنگ پذيري با آليزلرين رد تاييد شد. با استفاده از محيط DMEM و به كارگيري سلول هاي مزانشيمي كشت شده به عنوان لايه تغذيه كننده سلول هاي بنيادي جنيني موش بدون استفاده از هرگونه سايتوكاين و محرك رشد كشت شدند. پس از انجام پاساژ سلولي، كلوني هايي تشكيل شد، كه اين كلوني ها تا دو پاساژ ديگر هم كشت شدند كه هر بار بر ميزان تشكيل آن ها افزوده مي شد و در نهايت ماهيت بنيادي اين كلوني ها با رنگ آميزي آلكالين فسفاتاز اثبات شد.
نتيجه گيري: نتايج حاصل از تحقيق نشان داد سلول هاي بنيادي مزانشيمي جدا شده از مغز استخوان رت توان تمايزي به رده هاي استخواني را دارند و مي توان از آن ها به عنوان لايه تغذيه كننده براي جداسازي و كشت و تشكيل كلوني هاي سلول هاي بنيادي جنيني استفاده كرد. اين روش با حذف نياز سايتوكاين ها و محرك هاي رشد، روشي ساده و كارا براي جداسازي و كشت كلوني هاي سلول هاي بنيادي جنيني مي تواند باشد
چكيده لاتين :
Introduction: Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent cells derived from the inner cell mass (ICM) of blastocysts. A feeder layer and cytokines are necessary for culture of these embryonic cells in most species. The aim of this study was application of rat mesenchymal stem cells (MSCs) as a feeder layer for the isolation and culture of mouse embryonic stem cells. Materials and Methods: Mesenchymal stem cells were isolated from rat bone marrow and cultured in DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) medium supplemented with 10% FBS (fetal bovine serum). To verify the isolated cells, they were affected by osteocyte differentiation inducer to become bone mass. After twenty-one days, the differentiation was evaluated by Alizarin red staining. Blastocysts were obtained from Balb/c pregnant mice and cultured on this MSCs feeder layer. Two days later after hatching of blastocysts, the cells were trypsinized and the inner cell mass dissociated to the small cell clumps. These clumps were cultured on 12-well plates covered by the same MSCs without applying any cytokines or growth inducer. Two to three days after the passage, colonies appeared which were similar to embryonic stem cell colonies in morphology. These colonies were passaged two more times using the mentioned procedure and their identities were examined by morphological observation and alkalin phosphatase staining. Results: In this study we could easily cultured MSCs using DMEM media. The mesenchimic origin of cultured cells, which showed fibroblastic morphology, was proved by differentiation to bone masses using osteocyte inducer and detection with Alizarin red. By applying DMEM media and MSCs cells, as feeder layer, we could culture ESC without any need to cytokines or growth factors. After passage to the inner cell mass colonies were formed. These colonies were formed in two more other passages. The colonies were verified with alkalin phosphatase assay. Conclusion: Results of this study showed mesenchymal stem cells isolated from rat bone marrow can differentiate to osteoblaste line and can be used as feeder layer for isolation, culture and forming embryonic stem cells colonies. This method, by using MSCs as feeder layer and bypassing the need of cytokine and growth factors, seems to be a simple efficient method for culture and isolation of embryonic stem cells
