عنوان مقاله :
كلونينگ و بيان ژن آنزيم ضد قارچ نوتركيب كيتيناز باسيلوس پوميلوس در باسيلوس سوبتيليس 168
عنوان به زبان ديگر :
Cloning and expression of Recombinant antifungal chitinase enzyme of Bacillus pumilus in Bacillus subtilis 168
پديد آورندگان :
كشاورز، مصطفي پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري - گروه ژنتيك مولكولي , احمدي زيدآبادي، ميثم پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري - گروه ژنتيك مولكولي , احمديان، غلامرضا پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري - گروه ژنتيك مولكولي
كليدواژه :
كيتين , كيتيناز , كراسينگ اور , ژنتيك , بيماري هاي قارچي پوست , درمان
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: كيتين، پلي ساكاريد خطي و يكي از فراوان ترين پلي ساكاريدهاي طبيعي است كه جزء اصلي ساختار ديواره سلولي بسياري از موجودات است. كيتينازها، آنزيم هاي اصلي كاتاليز كننده كيتين به اجزا مونومري و اليگومري آن هستند و مي توانند به عنوان يك عامل ضد قارچ طبيعي استفاده شوند. هدف از اين تحقيق كلونينگ و بيان ژن نوتركيب كيتيناز در باكتري باسيلوس سوبتيليس در درمان عفونت هاي قارچي و جاي گزيني آن با محصولات سنتزي و سرطان زا بود.
مواد و روش ها: ژن كيتيناز باسيلوس پوميلوس با طراحي پرايمرهاي مناسب در وكتور الحاقي به ژنوم pDHAFB كلون گرديد. سازه ساخته شده با استفاده از كراسينگ اور دوگانه به درون ژن آميلاز كروموزوم باسيلوس سوبتيليس 168 منتقل و بيان آن توسط IPTG القا گرديد و عمل كرد آن بررسي گرديد.
يافته ها: سازه نوتركيب حاوي ژن كيتيناز توليد گرديد. بيان ژن با ايجاد هاله در اطراف كلوني هاي باكتري نوتركيب روي محيط حداقل شامل كيتين به عنوان منبع كربن مشاهده گرديد.
نتيجه گيري: ايجاد هاله در محيط حداقل حاوي كيتين نشان دهنده عمل كرد آنزيم كيتيناز نوتركيب و تجزيه كيتين مي باشد كه با توجه به اين خاصيت ضد قارچي مي تواند به عنوان ماده موثر درمان عفونت هاي قارچي انسان و ماده ايمن در دفع آفات و آلاينده هاي زيستي استفاده گردد
چكيده لاتين :
Introduction: Chitin, a linear polysaccharide and is one of the most abundant natural polysaccharides is the main component in numerous of organisms. Chitinase enzymes are essential enzymes catalyzing the
conversion of chitin to its monomeric or oligomeric components, therefore, chitinase can used as a natural antifungal agent. The purpose of this study is cloning and expression of recombinant chitinse gene in Bacillus subtilis in the treatment offungal infection effects and replacement with carcinogenic and synthetic products.
Materials and Methods: Chitinase gene of Bacillus.pumilus was cloned to integrate vector Pdh5 Through designed the appropriate pimers.built construct using dual crossing over for transferred into the amylase gene (amyE) of Bacillus subtilis168; and its expression was induced by IPTG and its function was evaluated.
Results: Recombinant construct containing chitinase gene was produced. Gene expression by creating halo around the recombinant bacteria colonies in minimal media including chitin as carbon source was observed.
Conclusion: Create a halo containing chitin in the minimal media represents the performance of recombinant chitinase enzyme to catalyze the chitin. Considering antifungal property can be effectively treated as a matter of human fungal infection and safe substance to excretion biological pest and pollutants.
