بررسي آنتي‌ ژنيسيته پروتئين نوتركيب L7/L12 بروسلا آبورتوس در بيماران مبتلا به تب مالت

Antigenicity of recombinant L7/L12 in patients with brucellosis

سابقه و هدف: پاسخ ايمني نسبت به پروتئين نوتركيب L7/L12، علاوه بر نقش ايمني زايي آن در پيش گيري تب مالت، اهميت آن در تشخيص اين عفونت را نيز نشان مي دهد. در اين تحقيق آنتي ژنيسيته پروتئين نوتركيب L7/L12 در بيماران مبتلا به تب مالت بررسي گرديد. مواد و روش ها: پس از تكثير ژن L7/L12، ژن در ناقل پلاسميدي pET28a كلون گرديد. سپس توليد پروتئين نوتركيب L7/L12 در باكتري اشريشياكلي انجام گرديد. جهت بررسي آنتي ژنيسيته پروتئين L7/L12 در بيماران مبتلا به تب مالت از آزمون وسترن بلات با پنج سرم بيمار و يك سرم مربوط به فرد سالم استفاده گرديد. يافته ها: ترادف نوكلئوتيدي ژن تكثير شده توسط روش PCR با ژن L7/L12 يكسان بود. توليد پروتئين نوتركيب L7/Ll2 با القا پلاسميد pET28a-L7/L12 توسط IPTG انجام گرديد. تخليص پروتئين با روش كروماتوگرافي تمايلي و با استفاده از كيت Ni-NTA انجام شد. سرم مبتلايان به تب مالت در روش وسترن بلات با پروتئين توليد شده واكنش داد. نتيجه گيري: توليد پروتئين نوتركيب L7/L12 در ميزبان اشريشياكلي امكان پذير است. پروتئين توليد شده خاصيت آنتي ژنيك خود را به خوبي حفظ مي كند. شناسايي پروتئين نوتركيب L7/L12 آنتي بادي هاي موجود در سرم بيماران مبتلا به تب مالت نشان گر تشابه اپي توپ هاي فرم نوتركيب با شكل طبيعي آن است. بنابراين، مي توان از آن در ايمني زايي و تشخيص مبتلايان تب مالت استفاده كرد.

Introduction: Immune response to recombinant L7/L12, in addition to protective role, may show its importance in detection Brucellosis tests. The aim of this study was to examine antigenicity of recombinant L7/L12 from Brucella abortus by Brucellosis human sera. Material and Methods: We amplified L7/L12 gene by polymerase chain reaction (PCR) method and sub- cloned to prokaryotic expression vector pET28a. Escherichia coli BL21-DE3-plySs was transformed with pET28a-L7/L12 and gene expression was induced by IPTG. Recombinant L7/L12 was further analyzed by Western Blot. Sera reactivity of five infected individual were further analyzed against the recombinant L7/L12 protein. Results: The sequencing result was confirmed by Sanger method and it was the same as L7/L12 gene. Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS was transformed with pET28a-L7/L12 and gene expression was induced by IPTG. The expressed protein was purified by affinity chromatography by Ni-NTA resin. The data also indicated that L7/L12 protein from Brucella abortus recognized by patient sera. Conclusion: Our data showed that recombinant L7/L12 protein can be produced by pET28a in Escherichia coli. This protein was recognized by sera in infected human as an antigen. Therefore, recombinant L7/L12 has same epitopes with natural form of this antigen. Recombinant L7/L12 also seems to be a promising antigen for protection and serologic diagnosis of Human brucellosis.