تشخيص مولكولي گونه‌ هاي كانديدا با استفاده از ژن كدكننده 65 كيلودالتوني مانوپروتئين به روش PCR

Molecular identification of a 65 kDa mannoprotein encoded gene of Candida species by PCR

سابقه و هدف: عفونت هاي قارچي مهاجم به عنوان يك مشكل اساسي در سلامت عمومي گزارش مي شود به ويژه كانديديازيس سيستميك كه موجب افزايش مرگ و مير در افراد ايمنوكومپرامايز از قبيل بيماران ايدزي و نوتروپنيك تحت شيمي درماني يا پيوند مغز استخوان مي شود. تشخيص اوليه كانديديازيس سيستميك اغلب مشكل است در نتيجه درمان موثر اغلب با تاخير شروع مي شود. بنابراين استفاده از روش هايي جهت كاهش زمان تشخيص عفونت هاي قارچي با كاهش مرگ و مير بيماري منتشره مرتبط مي باشد. ژن مانوپروتئين 65 كيلودالتوني كانديدا آلبيكنس كانديد مناسبي براي تشخيص مي باشد. هدف از اين مطالعه شناسايي گونه هاي متفاوت كانديدا (آلبيكنس، گلابراتا، پاراپسيلوزيس) با استفاده از تكنيك PCR مي باشد. مواد و روش ها: بر روي 107 مورد نمونه هاي كلينيكي آزمايش هاي كشت در محيط كورن ميل آگار حاوي توئين 80، توليد لوله زايا در محيط سرم، كشت در محيط كروم آگار هم چنين تست هاي جذب قندي با استفاده از كيت API 20 C AUX (Biomerieux, France) براي شناسايي انواع مختلف كانديدا انجام شد. آزمايش PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي گونه براي ژن مانوپروتئين 65 كيلودالتوني بر روي تمام نمونه ها انجام شد. يافته ها: با استفاده از روش هاي كشت و تست هاي بيوشيميايي 100 مورد نمونه كانديدا آلبيكنس، 6 مورد كانديدا گلابراتا و 1 مورد كانديدا پاراپسيلوزيس جداشده از نمونه هاي كلينيكي شناسايي شدند. آزمايش PCR با پرايمرهاي اختصاصي گونه بر روي نمونه هاي كلينيكي انجام شد كه در همه موارد يك باند با طول قطعه مورد انتظار براي كانديدا آلبيكنس، گلابراتا و پاراپسيلوزيس (124bp, 361bp, 475bp) به ترتيب به دست آمد و با همه موارد گونه هاي تشخيص داده شده با روش كشت مطابقت داشت. نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه روش PCR با به كارگيري پرايمرهاي اختصاصي گونه كانديدا جهت شناسايي گونه هاي كانديدا روشي قابل تكرار، سريع و اختصاصي است.

Introduction: Invasive fungal infections represent a major public health concern. In particular, systemic candidiasis remains an increasing source of morbidity and mortality especially in immunocompromised patients such as neutropenic patients undergoing antiblastic chemotherapy or bone marrow transplants. Early diagnosis is often difficult. Consequently, effective treatment is often delayed. PCR has the potential to decrease the time required to diagnose fungal infections and therefore reduce the mortality associated with disseminated disease.The MP65 gene of Candida albicansis appropriate for detection and identification. The aimofthisstudy was toidentifydifferentspecies of Candida (C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis) with PCR technique. Materials and Methods: All 107 yeast isolates were identified on cornmeal agar supplemented with tween-80, germ tube formation in serum, and assimilation of carbon sources in the API 20 C AUX (Biomerieux, France). Then, all isolates were tesed by PCR using by different species-specific PCR primers selected within the MP65 gene; a recently cloned gene encoding a mannoprotein adhesin. Results: A hundred of clinical isolates were determined as C. albicans and 6 of the isolates determined as C. glabrata and 1 of the isolates determined as C. parapsilosis. The species-specific PCR primers allowed differentiation of each of three Candida species by the amplicon length produced.The primers amplified all Candida species DNA tested (100% positivity) giving a band of the expected length (475 bp for C. albicans, 361bp for C. glabrata, 124bp for C. parapsilosis). The results were agreed with all culture results for Candida species detection. Conclusion: The results of this study showed that PCR method for rapididentification of Candida species with specific primers is reproducible, simple and specific.