زير همسانه سازي و بيان ژن SO6 گياه غاسول صابوني در باكتري E.coli و بررسي تيترآنتي بادي آن در رَت آزمايشگاهي

Subcloning and expression of SO6 gene, Saponaria Officinalis plant in E.coli and investigation of antibody titer in rats

مقدمه: پروتئين هاي غيرفعال كننده گياهي (RIP) به عنوان آنزيم هاي N-glycosidase عمل مي كنند و به وسيله چندين عضو از خانواده Caryophyllaceae مانند Saponaria Officinalis توليد مي شوند. ايزوفرم هاي مختلفي از RIP ها به وسيله Saponaria Officinalis بيان مي شوند. ايزوفرم SO6، آدنين 4324 را در توالي حفاظت شده GAGA در چهار لوپ SrRNA 28را دپورينه كرده و سنتز پروتئين را مختل مي كند. هدف اين مطالعه بيان ايزوفرم SO6 در باكتري E.coli و بررسي تيترآنتي بادي آن در رت هاي آزمايشگاهي است. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي ژن SO6 سنتز شده از پلاسميد pUC57-SO6 نوتركيب به وسيله آنزيم هاي محدود كننده BamHI و SalI جدا و در وكتور بياني(+) pET28a زيرهمسانه سازي شد. بيان پروتئين نوتركيب با IPTG القا گرديد. پروتئين SO6 نوتركيب به وسيله كروماتوگرافي تمايلي نيكل تخليص گرديد. به منظور تاييد پروتئين نوتركيب western blotting انجام گرفت. رت ها به صورت صفاقي با پروتئين تخليص شده واكسينه شدند و تيتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت. نتايج: واكنش PCR و هضم آنزيمي، زيرهمسانه سازي ژن SO6 را در وكتور بياني (+) pET28a تائيد كرد. يك باند پروتئيني kDa 29.5 در SDS-PAGE بيان بالاي پروتئين نوتركيب را نشان داد. آنتي بادي پلي كلونال، SO6 را شناسايي كرد. تست ELISA تيتر آنتي بادي قابل توجهي را بعد از تزريق پروتئين در گروه هاي تست در مقايسه با گروه هاي كنترل تائيد كرد. نتيجه گيري: از آنجايي كه آنتي ژن SO6 نوتركيب تخليص شده ايمونوژن است، اين آنتي ژن مي تواند براي تحقيقات ضد سرطاني و كانديد واكسن استفاده شود.

Introduction: Plant ribosome inactivating proteins act as N-glycosidase enzyme and produce by several family of Caryophyllaceae such as Saponaria Officinalis. Different Isoforms of RIPs expressed by Saponaria Officinalis. SO6 isoform depurinate Adenine 4324 in the conserved GAGA loop of 28SrRNA and disrupts protein synthesis. The aim of this study was expression of SO6 isoform in E.coli and investigation of antibody titer in rats. Methods: In this experimental study، SO6 synthetic gene was excised from recombinant pUC57- SO6 plasmid with BamHI and SalI restriction enzymes and subcloned into pET28a (+) expression vector. The expression of recombinant protein was induced by IPTG. Recombinant SO6 was purified by nickel affinity chromatography. Western blotting was performed to confirm the recombinant protein. Rats were immunized intraperitoneal with purified protein and IgG serum titer was assayed by ELISA. Results: PCR reaction and enzyme digestion confirmed subcloning of SO6 gene into pET28a (+) expression vector. A 29.5kDa protein band on SDS-PAGE showed a high level of recombinant protein expression. Polyclonal antibodies recognized SO6. ELISA confirmed significant antibody titer after injection of protein in test group compared with the control group. Conclusion: The recombinant purified SO6 antigen can be used for anti-cancer and vaccine candidate research.