جذب سلولي miRNA-101 و ارزيابي تاثير آن بر القاي سميت سلولي و بيانيوبي كوئيتين ليگاز HECTH9 در سلولهاي لوسمي ميلوئيدي حاد (AML)

MiRNA -101 transfection and its effect on the cytotoxicity induction and expression of ubiquitin ligase HECTH9 in acute myeloid leukemia cells (AML

مقدمه: در پژوهش حاضر از ليپوفكتامين 2000 به عنوان ليپوزوم كاتيوني جهت ترانسفكشن miR-101 به منظور بررسي سميت سلولي آن و تاثيرش بر بيان يوبي كوئيتين ليگاز HECTH9 در سلولهاي لوسمي ميلوئيدي حاد (AML) استفاده شد. روش بررسي: براي انجام اين مطالعه با استفاده از ليپوزوم كاتيوني ليپوفكتامين 2000 به عنوان نانو حامل، miR-101 به درون سلول هاي KG-1 (سلول هاي ميلوئيدي) و HBMF-SPH (سلولهاي مغز استخوان سالم) انتقال يافت. سپس با استفاده از تست MTT سميت سلولي 48 ساعته در هر دو رده سلولي مورد ارزيابي قرار گرفت. سپس اثر اين miRNA بر ميزان بيان ژن HECTH9 (يوبي كوئيتين ليگاز E3) با استفاده از تكنيك qRT-PCR ارزيابي گرديد. نتايج: يافته هاي اين مطالعه نشان دادند كه ليپوفكتامين به تنهايي براي هيچ يك از رده هاي سلولي سميت نداشت اما ليپوفكتامين حامل miR-101 (Lipo/miR-101) در سلول هاي KG-1 بيشترين سميت را نسبت به ساير تيمارها ايجاد كردند. نتايج حاصل از انجام تست qRT-PCR نشان داد كه تيمار Lipo/miR-101 در سلول هاي KG-1 سبب بيشترين افزايش بيان در ژن HECTH9 در سطح mRNA شد. نتيجه گيري: ليپوفكتامين به عنوان يك ليپوزوم كاتيوني مي تواند به طور موثري ترانسفكشن miR-101 را به درون سلول ها انجام دهد و مي تواند سبب شود كه miR-101 به طور بارزي اثرات ضد توموري خود را با افزايش بيان HECTH9 و تنظيم واسطه هاي مسير آپوپتوز ميتوكندريايي اعمال نمايد. بنابراين miR-101 مي تواند به عنوان يك مهار كننده تومور توانمند و يك عامل درماني موثر جهت ژن درماني در مبتلايان به AML مورد استفاده واقع شود.

Introdution: In the present study، Lipofactamine 2000 was used as a cationic liposome for miR-101 transfection in order to investigate its cytotoxicity and its effect on the expression of ubiquitin ligase HECTH9 in acute myeloid leukemia cells (AML). Methods: MiR- 101 was transferred to KG-1 cells (myeloid cells) and HBMF-SPH (healthy bone marrow cells) using lipofectamine 2000 as a nano carrier. Then، using the MTT test، the 48-hour cell toxicity in both cell lines was evaluated. The effect of this miRNA on the expression of HECTH9 gene (ubiquitin Ligaase E3) was evaluated using qRT-PCR technique. Results: The findings of this study showed that Lipofactamine alone was not toxic to any of the cell lines، but lipofectamine-containing miR-101 (Lipo / miR-101) in KG-1 cells produced the highest toxicity compared to other treatments. The results of qRT-PCR test showed that Lipo / miR-101 treatment in KG-1 cells caused the highest expression in HECTH9 gene at the mRNA level. Conclusion: Lipofactamine، as a cationic liposome، can effectively transfect miR-101 into the cells and can cause miR-101 to specifically display its antitumor effect by increasing the expression of HECTH9 and regulating pathways of mitochondrial apoptotic pathway. Therefore، miR-101 can be used as a potent tumor suppressor and an effective therapeutic agent for gene therapy in the patients with AML.