OCT4B1 و نقش آن در مهار بيان ژن هاي خانواده TRAF در رده هاي سلول سرطاني (AGS ،5637 و U87MG)

OCT4B1 and its Role in Suppression of TRAF Family Gene Expression in Cancer Cell lines

مقدمه: OCT4 يكي از ژن‌ هاي مهم و تأثيرگذار بر مكانيسم خود بازآفريني سلول (cell renewal) و هسته مركزي مجموعه پروتئيني است كه به‌ عنوان عامل بنيادي بودن (Stemness) عمل مي‌ كنند. اين ژن واريانت ­هاي متعددي از پروتئين OCT4 را كد مي‌ كند كه مشهورترين آن‌ ها OCT4B1 است. اين واريانت به ميزان بالايي در رده‌هاي سلول سرطاني و نيز بافت‌ هاي سرطاني بيان مي‌ شود.. آپوپتوزيس توسط خانواده‌ هاي مختلف ژني كنترل و انجام مي‌ شود و يكي از اين گروه‌ هاي ژني خانواده TRAF (TNF receptor-associated factor) است كه شامل سه ژن (TRAF1 ،TRAF2 و TRAF3) مي‌ باشد. اطلاعاتي در مورد تأثير واريانت OCT4B1 بر بيان ژن‌ هاي خانواده TRAF، در دست نيست، بنابراين هدف اين مطالعه بررسي تأثير مهار واريانت OCT4B1 بر بيان سه ژن خانواده TRAF مي‌ باشد. مواد و روش‌ ها: رده‌ هاي سلول سرطاني AGS (آدنوكارسينوم معده)، 5637 (تومور مثانه) و U87MG (تومور مغز) در دو گروه تست و كنترل و با شرايط يكسان كشت و پس از رسيدن به تراكم سلولي مورد نظر با استفاده از siRNA اختصاصي OCT4B1 (گروه تست) و scramble siRNA (گروه كنترل) مورد ترانسفكشن قرار گرفتند. پس از 48 ساعت RNA سلولي تخليص و cDNA مربوطه سنتز گرديد و با روش PCR Array، بيان ژن‌ هاي مورد نظر (خانواده TRAF)، در هر رده سلولي و گروه‌ هاي دوگانه تست و كنترل تعيين و بيان هر ژن با استفاده از نرم‌ افزار اختصاصي شركت RT SA Biosciences (RT) محاسبه گرديد. يافته‌ ها: نتايج نشان داد تغييرات بيان ژني در سه رده سلول سرطاني مورد مطالعه تقريباً مشابه است و بيان هر سه ژن مورد مطالعه، به دنبال مهار OCT4B1، كاهش معني ­داري را نشان مي‌ دهد. نتيجه‌ گيري: طبق نتايج به ‌دست‌ آمده، مهار OCT4B1 باعث مهار بيان ژن‌ هاي خانواده TRAF و القاء آپوپتوزيس در رده‌هاي سلول سرطاني مي­ شود. بنابراين تأثير مهار OCT4B1 بر فرايند آپوپتوزيس مي‌ تواند در مطالعات آتي شناخت مكانيسم ايجاد و درمان سرطان مورد توجه قرار گيرد.

Introduction: OCT4 is one of the major genes for controlling cell renewal and is the core of the proteins that is known as stemness state.OCT4 encodes several variants, the most famous is OCT4B1.This variant has expressed in cancer cell lines and cancer tissues and has anti-apoptotic potency. Apoptosis has an important role in the pathogenesis of various diseases including cancer and autoimmune disorders. Apoptosis is regulated by different gene families; TRAF (TNF receptorassociated factor) is one of these families which consist of three genes (TRAF1, TRAF2 and TRAF3).There is little Information about the effect of OCT4B1 on gene expression of TRAF family; so, the aim of this study was to evaluate the effect of OCT4B1 suppression on expression of TRAF family. Material and Methods: cancer cell lines AGS (gastric adenocarcinoma), 5637 (bladder cancer) and U87MG (brain tumor) were cultured in the test and control groups with the same conditions and were transected after reaching the desired cell density, using specific siRNA OCT4B1 (test group) and scramble siRNA (control). Cellular RNA was extracted and cDNA were synthesized 48 hours after transfection. Gene expressions of interest (TRAF family) were estimated by PCR Array method and the results were analyzed by RT software. Results: A gene expression alteration in studied in the three cancer cell lines were similar. Conclusion: According to the results, OCT4B1 suppression inhibits the expression of TRAF family and this induces apoptosis in the cancer cell lines. Therefore, OCT4B1 can be considered in the recognition of mechanism of cancer and also cancer therapy.