تهيه كشت سلولي اوليه ماهي

Preparation of fish primary cell culture

ويروس‌ها از عوامل ايجادكننده خسارات هنگفت در پرورش آبزيان مي‌باشند. انواع كشت‌‌هاي سلولي از جمله كشت‌هاي اوليه، روش‌هاي مناسبي براي تشخيص و جداسازي ويروس‌ها مي‌باشند. از آنجاكه دسترسي به تيره‌هاي سلولي به ويژه در خصوص ماهيان براحتي ساير گونه‌ها نمي‌باشد و نيز براي تمام ماهيان هنوز تيره سلولي ايجاد نگرديده است، لذا در اين تحقيق اقدام به تهيه و استاندارد نمودن كشت سلولي اوليه ماهي گرديد. نمونه‌هايي از اندام‌هاي داخلي ماهي قرمز (Carassius auratus) شامل كليه، كبد، عضلات و تخمدان و نيز از اندام‌هاي خارجي شامل باله‌ها، بافت همبند قسمت پوزه و آبشش‌ها، تهيه و بر طبق دستورالعمل‌هاي استاندارد آماده گرديدند. جهت تهيه كشت‌سلولي اوليه ماهي از روش‌هاي هضم آنزيمي كوتاه‌مدت، طولاني‌مدت، روش نشا‌كاري بافت‌هاي ريز‌شده و روش معمولي استفاده گرديد. از محيط كشت EMEM غني‌شده با سرم جنين‌گاو در درجه‌حرارت 25 درجه سانتي‌گراد استفاده گرديد. سلول‌هاي بدست آمده از روش‌هاي مختلف، رشد مناسبي داشته و به سطح پوششي كامل رسيدند و از آن‌ها چندين پاساژ متوالي تهيه گرديد. بهترين نتيجه، از اندام‌هاي تخمدان و عضلات و روش هضم آنزيمي طولاني‌مدت با آنزيم تريپسين بدست آمد. با بكارگيري نتايج اين تحقيق مي‌توان در مواقع لزوم نسبت به تهيه كشت سلولي اوليه جهت جدا‌سازي ويروس‌ها و تشخيص بيماري‌هاي ويروسي ماهيان در كشور اقدام نمود.

The viruses cause heavy losses in fish farming. Types of cell cultures, including primary cultures are appropriate tools to diagnosis and isolation the viruses. In this study with regard to the appropriate cell lines, especially for fish is not possible, or there are no suitable cells for all fish species was provided, the preparation and standardization of fish primary cell culture were done. Some samples from goldfish (Carassius auratus) internal organs including the kidney, liver, muscles, ovary and external organs including fins, snout connective tissue and gills collected and prepared according to standard procedures. The methods were used include: Enzymatic disaggregated by short and long time trypsinization and without enzyme, by planting minced tissues and ordinary method. The EMEM enriched by FBS was used for growing cells in 25oC incubation. The cells had suitable growth and reached to complete confluency and several subcultures obtained from them. The best result obtained from long time trypsinization of ovaries and muscles. Using the instructions provided in this study can be taken to prepare the primary cell culture for virus isolation and diagnosis of fish viral diseases in the country.